Manual de Prácticas de Laboratorio de biologíA




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Características de los seres vivos


Correcto Uso del Microscopio Estereoscópico y del Microscopio Compuesto, como las herramientas básicas para la observación de ejemplares de cualquier reyno.

2.1 Práctica # 3. Uso del Microscopio Estereoscópico

(Lupa)



2.1.1Introducción

Una de las herramientas básicas de un laboratorio de biología es el microscopio, particularmente el microscopio estereoscópico o de lupa, es ampliamente utilizado para la observación de especímenes cómo la macro fauna y mega fauna, así mismo, la herramienta puede ser utilizada no solo en la biología si no también por otras disciplinas como la geología para la observación de rocas, grava y diferentes sedimentos y minerales.

Del microscopio es sumamente importante conocer:

_ Sus partes y la función de cada una de ellas.

_ Cómo manipular el sistema óptico para obtener el mayor aumento y resolución.

_ Cómo manipular el sistema de iluminación ya que la resolución de la imagen a su máximo aumento, depende de su adecuado manejo.

_ Cuidados y almacenamiento.

PARTES DEL MICROSCOPIO

El microscopio estereoscópico es un aparato óptico usado para amplificar y resolver detalles finos de un objeto relativamente grandes. Está compuesto de diferentes partes: mecánica, óptica y de iluminación.

PARTE MECÁNICA

1. Base o pie: sirve de soporte al microscopio y suele tener el peso suficiente para darle estabilidad al aparato.

2. Brazo: continuación de la base o pie que permite movilizar al microscopio con

la mano.

3. Platina: sostiene las muestras directamente o recipientes que contengan las muestras, esta estructura puede ser blanca, negra o translúcida para permitir el paso de luz proveniente de la base de la platina.

4. Pinzas: sostienen al espécimen o al contenedor sobre la platina.

5. Cabezal: es la base de los oculares y contiene los lentes de aumento y en su parte inferior puede sostener una fuente de luz incidente.

6. Tornillo macro métrico: mueve el cabezal hacia arriba o hacia abajo, acercando o alejando rápidamente el objetivo a la distancia focal correcta con respecto a la muestra.

7. Anillo de aumento: permite modificar la óptica para incrementar o disminuir el número de aumentos.

PARTE ÓPTICA

8. Oculares: compuestos por lentes que multiplican el aumento del objetivo. Están ubicados en la parte superior del cabezal. Un buen ocular (10x) puede permitir un aumento total de 100x.

9. Objetivo: compuesto por lentes de diferente aumento. Se encuentran ubicados en la parte inferior del cabezal, no son movibles ni intercambiables y su aumento depende de las características particulares del microscopio

SISTEMA DE ILUMINACIÓN

10. Fuente de luz: puede utilizarse luz artificial de una lámpara externa (fibra óptica, luz incidente) o una que se inserta en la base o pie del microscopio, algunos microscopios poseen una fuente incidente en la base del cabezal o en el brazo.

EJERCICIO TEÓRICO

Ubique en la figura que se presenta a continuación las partes del microscopio discutidas.



PODER DE RESOLUCIÓN

La amplificación total de un microscopio de luz es el producto de la amplificación de dos sistemas de lentes (ocular y objetivo). La amplificación podría aumentarse indefinidamente empleando lentes adicionales, pero ello no se puede lograr en la práctica debido a una propiedad que tiene las lentes conocida como poder de resolución.

El poder de resolución se define como la capacidad de un lente para presentar dos puntos cercanos como puntos diferentes y separados. El poder de resolución puede calcularse dividiendo la longitud de onda de la luz empleada, entre otra característica de las lentes conocida como apertura numérica, esta última es función del diámetro real del objetivo en relación con su distancia focal y el poder de desviar el rayo luminoso o índice de refracción del medio que hay entre la muestra y el objetivo.

Poder de resolución = Longitud de onda / Apertura numérica

En conclusión para obtener la imagen de mayor aumento, más nítida y con mayor poder de resolución se debe:

_ Disponer de lentes de óptima calidad.

_ Disponer de oculares de gran aumento.

USO DEL MICROSCOPIO

Para el buen uso del microscopio en el laboratorio de biología se deben tener en cuenta los siguientes aspectos.

_ Los microscopios están numerados y se guardan en gabinetes.

_ A cada estudiante del grupo se le asigna un microscopio por el cual será responsable.

_ La mesa donde se colocará el microscopio para hacer la observación debe ser estable para evitar vibraciones de la muestra durante el examen.

_ La posición del observador ante el microscopio debe ser cómoda y a una altura correcta.

_ La mesa de trabajo debe estar limpia y libre de libros, cuadernos, bandejas y reactivos.

_ Cuando se transfiera el microscopio del gabinete a la mesa de trabajo, se sostiene fuertemente el brazo del microscopio con la mano derecha y se coloca la mano izquierda por debajo del instrumento. Si no se realiza de esta manera, las probabilidades de golpear contra el mesón o dejarlo caer se elevan.

Bajo ninguna circunstancia se debe tomar el microscopio con una sola mano y menos aún, dos microscopios con dos manos.

_ Nunca se deben de enrollar los cables de la fuente luminosa alrededor del microscopio.

_ Una vez finalizada la observación, se limpian las lentes, la platina y se guarda siguiendo las mismas instrucciones de transporte.

[Texto de Introducción]

      1. Objetivo

Al final de la práctica el estudiante será competente para:

Reconocer las partes de un microscopio estereoscópico y su función respectiva.

Utilizar correctamente un microscopio para observar especímenes.

      1. Material

Colectar 6 objetos (especímenes ya sean vegetales o animales o inanimados, naturales o artificiales para su observación.
        1. Instrumental


Microscopio Estereoscopio, Caja de Petri, Auja de Disección, Pinzas.



      1. Desarrollo

Una vez finalizado el reconocimiento de cada una de las partes, en el esquema correspondiente, complete el siguiente cuadro:





Función

Parte óptica

Parte mecánica

Platina










Pie










Oculares










Tornillo de enfoque










Anillo de aumento










PROCEDIMIENTO

Los objetos colectados o aportados por el instructor serán observados bajo la óptica del microscopio estereoscópico de la siguiente manera:

1. Colocar sobre la platina o sobre una caja de pettri el espécimen a observar.

2. Situar la parte que va a examinar en el centro de la platina.

3. Ajustar la fuente de iluminación sobre la porción a observar de la muestra.

4. Seleccionar el aumento más bajo y enfocar mediante el tornillo de enfoque.

5. Si el tornillo de enfoque no da la nitidez requerida se tendrá que modificar la distancia del cabezal a la muestra mediante el ajuste del cabezal en el brazo.

6. cambiar de aumentos hasta obtener la visión requerida, si es necesario se deberán hacer más ajustes como en el punto 5.

Una vez realizadas las observaciones:

1. Anotar que se observó y dibujarlo en su cuaderno bitácora.

2. Remover los especímenes y/o contenedores de muestra.

3. Limpiar la platina y oculares (estos con el material apropiado)

4. Guardar el microscopio.

Nota.- para efecto de no dañar los oculares las mujeres no deberán de portar ningún tipo de maquillaje en los ojos.

RESULTADOS

Observe en detalle los distintos materiales presentados (pequeños insectos, hojas, pelos, etc.). Enfoque primero con el menor aumento y luego con el mayor aumento. Haga un dibujo de lo observado, y coloque el aumento utilizado.









Objeto 1 Objeto 2

Aumento _______ Aumento _______

Descripción de lo observado Descripción de lo observado

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________







Objeto 3 Objeto 4

Aumento _______ Aumento _______

Descripción de lo observado Descripción de lo observado

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________



Objeto 5 Objeto 6

Aumento _______ Aumento _______

Descripción de lo observado Descripción de lo observado

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

CUIDADOS Y ALMACENAMIENTO DEL MICROSCOPIO

Un microscopio puede tener una vida media larga, siempre y cuando se tomen precauciones en el cuidado de lentes y se cumplan normas para su transporte y almacenamiento.

Cuidado de lentes

Para utilizar efectivamente la mayor cantidad de luz, que entra al microscopio, es importante que el espejo (si lo tiene) y las lentes se mantengan limpios. Para limpiarlos se deben utilizar papeles y soluciones de limpieza apropiados para evitar el daño de las lentes.

Papeles de limpieza: Únicamente se deben utilizar papeles ópticamente limpios.

Lo que se utiliza con más frecuencia en los laboratorios son unas pequeñas libretas que contienen este tipo de papel las cuales se deben proteger del polvo. Está prohibido utilizar pañuelos, servilletas o cualquier otro tipo de material para limpiar las lentes aunque éstos estén limpios.

Objetivo: Las lentes objetivos frecuentemente se ensucian con material proveniente de las muestras y los dedos. Los papeles descritos anteriormente pueden eliminar grasa y otros materiales que se depositan sobre el objetivo, pero la limpieza final usualmente se llevan a cabo con solventes orgánicos, preferiblemente con xilol.

Es importante utilizar la cantidad adecuada de solvente, ya que un exceso puede dañar el cemento que mantiene unido el lente a la base. El pequeño flujo de aire que se obtiene con una jeringa también puede ser adecuado para remover la pelusa remanente.

Oculares: Para comprobar la limpieza del ocular, éste se debe rotar entre los dedos y al mismo tiempo se debe observar a través del microscopio. Una imagen que rota constituye una evidencia de la presencia de suciedad. Proceda a limpiar ambos lentes con el papel adecuado y remueva la pelusa restante con un pequeño chorro del aire.

Almacenamiento

El microscopio debe almacenarse en óptimas condiciones. Antes de guardarlo es necesario:

Remover las muestras de la platina.

Desconectar la lámpara (si el microscopio lo requiere) y guardarla dentro de la caja del microscopio o cubrirlo con su capucha.

Transferir el microscopio de la mesa al gabinete, previamente abierto, tomando con una mano, el brazo del microscopio y la base con la otra.

      1. Método de Evaluación

  • Presentar un reporte individual de lo observado en el formato de reporte técnico (Problema, metodología utilizada, resultados y conclusión).

  • El reporte se hará a mano y será entregado a los ocho días de la fecha de la práctica.



      1. Bibliografía

Benson, Harold. 1979. Microbiological Applications. A Laboratory Manual in General. Microbiology. Third edition. Wm. C. Brown Company Publishers. Dubuque, lowa

Brock Th.; Brock K. 1973. Basic Microbiology with Applications. Prentice-Hall, Inc.New Jersey.

Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos Generales (segunda edición). Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela.

Pelczar and Chan. 1977. Laboratory Exercises in Microbiology. Fourth edition. McGraw-Hill Book Company.

Seely. H; Van Demark, P. 1962. Microbios en acción. Manual de Laboratorio para Microbiología. Editorial Blume. Madrid-España.

Tortora G.J., B.R. Funke and C.L. Case. 2001. Microbiology an Introduction Seventh Edition. The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc.

Prof. Milagros de Vizcarrondo

Prof. Sofía Gutiérrez de Gamboa Noviembre 2001.

2.2 Práctica # 4. Uso del Microscopio Compuesto



      1. Introducción

Una de las herramientas básicas de un laboratorio de biología es un microscopio de luz o compuesto. Este tipo de microscopio recibe este nombre ya que permite el paso de luz no alterada a través de un sistema de lentes de manera de producir un campo brillante donde se pueden observar pequeños objetos. Para poder estudiar microorganismos como bacterias, hongos, algas, parásitos, etc. el microscopio debe estar provisto de un sistema óptico y mecánico sin defectos.

Se define a un microscopio como un aparato óptico que se utiliza para ver objetos que no se aprecian a simple vista. Existen en muchas formas y tipos los cuáles en general varían dependiendo de su uso. Los microscopios son aparatos que, en virtud de las leyes de formación de imágenes ópticas aumentadas a través de lentes convergentes, permiten la observación de pequeños detalles de una muestra dada que a simple vista no se percibirían.

Microscopio compuesto: Este tipo de microscopio implica la combinación de tres sistemas: óptico (lentes), iluminación y mecánico. El objeto que se pretende observar es iluminado uniformemente, pretendiéndose que la luz pase a través del objeto resultando una imagen con buen contraste e iluminación.

En general los medios de enseñanza superior utilizan, los microscopios estereoscópico y compuesto, aunque existen otros como en microscopio invertido, el de contraste de fase y el electrónico que son para usos más específicos.

Con el propósito de ampliar un conocimiento a través de investigación, el hombre ha construido múltiples instrumentos que le han permito acceder, donde los sentidos no podían penetrar. Como ejemplo: el telescopio abrió a la humanidad las puertas de lo infinitamente grande, en su caso el microscopio hizo posible conocer los mundos de dimensiones ínfimas, entre ellos la célula, base de la vida.

PARTES DEL MICROSCOPIO

El microscopio compuesto es un aparato óptico usado para amplificar y resolver detalles finos de un objeto microscópico. Está compuesto de diferentes partes: mecánica, óptica y de iluminación.

PARTE MECÁNICA

1. Base o pie: sirve de soporte al microscopio y suele tener el peso suficiente para darle estabilidad al aparato.

2. Columna: une la platina a la base y sostiene al condensador y al diafragma.

3. Tubo: sostiene al ocular y al objetivo y los mantiene separados por la distancia de trabajo correcta.

4. Brazo: continuación de la base o pie que permite movilizar al microscopio con la mano.

5. Platina: sostiene las preparaciones con la muestra colocadas sobre una perforación central que deja pasar la luz que viene del condensador o del espejo.

6. Pinzas: sostienen a la lámina portaobjeto con firmeza sobre la platina.

7. Revolver: permite colocar en posición de trabajo, alternativamente, los objetivos

que posee el microscopio.

8. Tornillo macro métrico: mueve la platina hacia arriba o hacia abajo, acercando

o alejando rápidamente el objetivo a la distancia de trabajo aproximada con respecto a la muestra.

9. Tornillo micrométrico: permite mover lentamente y con precisión el tubo hacia la platina o viceversa.

PARTE ÓPTICA

10. Oculares: compuestos por lentes que multiplican el aumento del objetivo. Están ubicados en la parte superior del tubo. Un buen ocular (10x) puede permitir un aumento total de 1000x.

11. Objetivos: compuesto por lentes de diferente aumento. Se encuentran ubicados en la parte inferior del tubo (sistema de revolver). Normalmente un microscopio de luz dispone de tres lentes objetivo: 10X, 40X y 100X, independientes de intercambiables. Cada uno de ellos tiene un aumento dado, y su propósito es magnificar el objeto para producir una imagen real que se proyecta hasta el plano focal del ocular.

Para calcular el aumento de un microscopio, basta multiplicar el aumento del ocular por el aumento del objetivo. Por ejemplo, si estamos utilizando un ocular de 10X y un objetivo de 40X, el aumento a que estamos viendo la preparación será: 1OX x 40X = 400X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada 400 veces.

SISTEMA DE ILUMINACIÓN

12. Fuente de luz: puede utilizarse luz artificial de una lámpara externa o una que se inserta en la base o pie del microscopio. Cuando se utiliza la lámpara externa se requiere de un espejo.

13. Espejo: lo requieren aquellos microscopios que trabajan con lámparas externas y permite reflejar hacia arriba la luz que debe atravesar el diafragma, la platina, la preparación y el sistema óptico. El espejo plano se utiliza cuando hay bastante luz y el cóncavo cuando hay poca luz.

14. Condensador: concentra el haz luminoso en la preparación.

15. Diafragma: regula la cantidad de luz que pasará a través de la preparación.

EJERCICIO TEÓRICO

Ubique en la figura que se presenta a continuación las partes del microscopio discutidas.



2.2.2 Objetivo

Al finalizar el estudiante sera competente para:

- Reconocer las partes de un microscopio compuesto y su función respectiva.

- Utilizar correctamente un microscopio compuesto para observar láminas o preparaciones.

2.2.3 MATERIALES Y EQUIPO:

  1. Microscopio compuesto

  2. Portaobjetos

  3. Cubreobjetos

  4. Navajas de un filo

  5. Pinzas de disección

  6. Preparaciones permanentes y semipermanentes

2.2.4 Desarrollo

[Con las láminas portaobjeto que le suministre el profesor observe la muestra con el microscopio de luz utilizando el objetivo adecuado. Para ello se procede de la siguiente manera:

1.- Realizar el aguaste de iluminación de Köhler (ver anexo).

2. -Colocar sobre la platina la lámina portaobjeto con la muestra colocada en la parte superior.

3.- Situar cuidadosamente la parte que va a examinar sobre el agujero central de la platina.

4.- Ajustar la fuente de iluminación hasta que pase la mayor cantidad de luz a través de la muestra.

El diafragma y el condensador, se deben ajustar hasta que la luz cubra todo el campo visual.

5.- Seleccionar el objetivo adecuado y con el tornillo macrométrico aproximar a la lámina el tubo del microscopio hasta que los separe aproximadamente la distancia focal adecuada.

6.- Observar por el ocular, con ambos ojos abiertos, aproximando lentamente el objetivo, con ayuda del tornillo macrométrico.

7.- Enfocar totalmente la muestra con el tornillo micrométrico y ajustar el diafragma y el condensador hasta lograr una buena iluminación, es decir, ni demasiado brillante ni demasiado oscuro.

Una vez realizadas las observaciones:

1. Anotar lo observado en los diagramas circulares.

2. Guardar el microscopio.

3. Reportar cualquier anomalía con el aparato.

Nota.- para efecto de no dañar los oculares las mujeres no deberán de portar ningún tipo de maquillaje en los ojos.

CUIDADOS Y ALMACENAMIENTO DEL MICROSCOPIO

Un microscopio puede tener una vida media larga, siempre y cuando se tomen precauciones en el cuidado de lentes y se cumplan normas para su transporte y almacenamiento.

Cuidado de lentes

Para utilizar efectivamente la mayor cantidad de luz, que entra al microscopio, es importante que el espejo (si lo tiene), el condensador, y las lentes se mantengan limpios. Para limpiarlos se deben utilizar papeles y soluciones de limpieza apropiados para evitar el daño de las lentes.

- Papeles de limpieza: Únicamente se deben utilizar papeles ópticamente limpios.

Lo que se utiliza con más frecuencia en los laboratorios son unas pequeñas libretas que contienen este tipo de papel las cuales se deben proteger del polvo. Está prohibido utilizar pañuelos, servilletas o cualquier otro tipo de material para limpiar las lentes aunque éstos estén limpios.

- Objetivos: Las lentes objetivos frecuentemente se ensucian con material proveniente de las láminas y los dedos. Los papeles descritos anteriormente pueden eliminar grasa y otros materiales que se depositan sobre el objetivo, pero la limpieza final usualmente se lleva a cabo con solventes orgánicos, preferiblemente con xilol.

Es importante utilizar la cantidad adecuada de solvente, ya que un exceso puede dañar el cemento que mantiene unido el lente a la base. El pequeño flujo de aire que se obtiene con una jeringa también puede ser adecuado para remover la pelusa remanente.

- Ocular: Para comprobar la limpieza del ocular, éste se debe rotar entre los dedos y al mismo tiempo se debe observar a través del microscopio. Una imagen que rota constituye una evidencia de la presencia de suciedad. Proceda a limpiar ambos lentes con el papel adecuado y remueva la pelusa restante con un pequeño chorro del aire.

Almacenamiento

El microscopio debe almacenarse en óptimas condiciones. Antes de guardarlo es necesario:

- Remover la lámina portaobjeto de la platina.

- Limpiar el objetivo de inmersión, si éste fue utilizado.

- Colocar el objetivo de menor aumento en posición de uso.

- Desconectar la lámpara (si el microscopio lo requiere) y guardarla dentro de la caja del microscopio.

- Transferir el microscopio de la mesa al gabinete, previamente abierto, tomando con una mano, el brazo del microscopio y la base con la otra.

      1. Método de Evaluación

  • Presentar un reporte individual de lo observado en el formato de reporte técnico (Problema, metodología utilizada, resultados y conclusión).

  • El reporte se hará a mano y será entregado a los ocho días de la fecha de la práctica.

  • Cuestionario



      1. Bibliografía

[Benson, Harold. 1979. Microbiological Applications. A Laboratory Manual in General

Microbiology. Third edition. Wm. C. Brown Company Publishers. Dubuque, lowa Brock Th.; Brock K. 1973. Basic Microbiology with Applications. Prentice-Hall, Inc.

New Jersey.

Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos Generales (segunda edición). Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela.

Pelczar and Chan. 1977. Laboratory Exercises in Microbiology. Fourth edition. Mc Graw-Hill Book Company.

Seely. H; Van Demark, P. 1962. Microbios en acción. Manual de Laboratorio para Microbiología. Editorial Blume. Madrid-España.

Tortora G.J., B.R. Funke and C.L. Case. 2001. Microbiology an Introduction Seventh Edition. The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc.

CUESTIONARIO:

1.- El microscopio es un instrumento óptico. Investigue los diferentes usos de este instrumento en la ciencia y que otros tipos de microscopios existen.

2.- Cual es la diferencia entre el microscopio estereoscópico y compuesto.

3.- Sin cambiar la intensidad de la fuente luminosa, como intensificaría la iluminación en el campo de observación de un microscopio compuesto.

4.- Explique como se realiza el enfoque de una preparación permanente en un microscopio compuesto.

5.- Una vez que se realiza el primer enfoque, que sucede cuando se cambia del objetivo 10x al objetivo 40x con respecto a la distancia de trabajo, y el campo de observación.

ANEXO 1

Ajuste de iluminación Köhler

1.- colocar una preparación en la platina en el objetivo de 10x y enfocar.

2.- cerrar el diafragma de campo. Este es el diafragma en la parte fija del microscopio, generalmente en la base, sobre la fuente de iluminación

3.- enfocar el condensador. Lentamente y con cuidado, subir y bajar el condensador con su perilla, hasta que la imagen del diafragma sea nítida y con un halo entre rojo y azul.

4.- abrir el diafragma de campo justo antes de cubrir la totalidad del campo. En caso de ser necesario, centrar con los tornillos de centrado del condensador. Terminar de abrir el diafragma, justo hasta completar el campo.

5.- finalmente ajustar el contraste con el diafragma del condensador.

RESULTADOS

Dibujar en los círculos lo observado, anotando el objetivo utilizado y el aumento final, divida cada círculo en dos considerando el uso de dos objetivos.





Lámina No. 1 Lámina No. 2

Objetivo: _______ Objetivo: ______

Ocular: ________ Ocular: ________

Aumento: ______ Aumento: ______

Descripción de lo observado: Descripción de lo observado:

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________



Lámina No. 3 Lámina No. 4

Objetivo: _______ Objetivo: ______

Ocular: ________ Ocular: ________

Aumento: ______ Aumento: ______

Descripción de lo observado: Descripción de lo observado:

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________



Lámina No. 5 Lámina No. 6

Objetivo: _______ Objetivo: ______

Ocular: ________ Ocular: ________

Aumento: ______ Aumento: ______

Descripción de lo observado: Descripción de lo observado:

_________________________ _________________________

_________________________ _________________________


3.1 Práctica # 5. Taxonomía

Tradicional y Cladísta


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