Tema I: Respuestas Celulares Ante el Estrés y las Agresiones por toxicos: Adaptacion, Lesion y Muerte




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Luis Gerardo Romera O´hara

20070010935

Tema I: Respuestas Celulares Ante el Estrés y las Agresiones por toxicos: Adaptacion, Lesion y Muerte

Introducción a la Patología

1. Definicion de Patología

Patología es el estudio (logos) de la enfermedad (pathos). Esta disciplina se encarga del estudio de los cambios estructurales, bioquímicos y funcionales que subyacen a la enfermedad en las células, tejidos y órganos. Esta ciencia aporta una base racional para la asistencia clínica y el tratamiento, utilizando herramientas que permitan explicar los motivos y las consecuencias de los signos y síntomas que presentan los pacientes. Por lo tanto, sirve como puente entre las ciencias básicas y la medicina clínica, y es la base científica de toda la medicina.
2. Etapas de la Patología:

a. Etapa Humoral: Los primeros documentos históricos médicos son los papiros egipcios de 1500 a.c. conservados en número de 12 y que tratan preferentemente de aspectos clínicos, aunque existen estatuillas que representan patologías como enanos, jorobados o niños raquíticos.

La tuberculosis y lesiones vasculares como ateroesclerosis son muy frecuentes en las momias egipcias. Son los griegos quienes confieren a la medicina un carácter precientífico, pasando las enfermedades de considerarse hechos aislados, a ser efecto del conjunto de alteraciones de la naturaleza individual y del medio que rodea al hombre. Hipócrates realiza una observación objetiva de la enfermedad y analiza su causa y efecto. Su libro El Cuerpo Hipocrático contiene dichos conocimientos, muchos de los cuales provienen de los manuscritos médicos rescatados por los eruditos alejandrinos del siglo III a.C. Galeno como Hipócrates, partió de la teoría humoral, identifica los 4 elementos de la naturaleza con los 4 humores del organismo: bilis amarilla ó colé ; sangre ó hema; bilis negra ó atrabilis y flema ó pituita. Cuyas combinaciones y predominio condicionan los diversos aspectos de la enfermedad. La salud es el resultado del equilibrio entre estos humores.

Durante el período romano de la medicina, no se observan cambios fundamentales en la concepción científica de la enfermedad y es ésta medicina romana con su herencia griega la que se difunde a la Europa medieval. Durante cerca de 10 siglos, la obra de Hipócrates es considerada como la fuente inagotable del conocimiento médico. La edad media ve en Hipócrates al indiscutible oráculo de la medicina. La teoría humoral de la enfermedad declina hacia el siglo XVI con el estudio del cuerpo humano por los anatomistas del renacimiento.
b. Etapa Orgánica: La anatomía patológica tiene su origen durante el Renacimiento europeo entre 1450 y 1600 de nuestra era, fundamentalmente gracias a los trabajos de exploración y descripción del organismo humano por anatomistas de la época con Andreas Vesalius quien en 1543 publica su libro La Fábrica del cuerpo humano, obra que destruye numerosos conceptos galénicos erróneos, al demostrar que sus observaciones no correspondían al cuerpo humano por estar realizadas sobre animales.

Al generalizarse la práctica y observación anatómica, se identifican mayores datos sobre las modificaciones estructurales de los órganos lesionados por diversas patologías, ignorándose en que momento el médico renacentista deja de explorar el cuerpo humano con afán de conocimiento puramente anatómico y se sumerge en busca de la enfermedad.

Antonio Benivieni (1440-1505) Pionero de la Anatomía Patológica, trata por primera vez de relacionar la sintomatología de la enfermedad, que condujo al sujeto a la muerte, con las observaciones de la autopsia. Su libro, De las causas ocultas y milagrosas de las enfermedades y su curación describe numerosas observaciones de patología microscópica y 15 estudios de autopsia.

Giovanni Batista Morgagni (1682-1771) conforma sobre bases sólidas la Anatomía Patológica como ciencia, organizando la investigación experimental y la interpretación clínica, demostrando la correlación entre alteración anatómica local y la manifestación clínica de la enfermedad. Establece en los órganos el sitio de la enfermedad y la variedad de los síntomas por la lesión de los diversos órganos afectados. En 1760 publica su libro Sobre los lugares y las causas de las enfermedades indagadas a través de la anatomía, extensa obra que contiene historias clínicas y autopsias de más de 700 casos con detalladas descripciones macroscópicas de aneurismas, cirrosis hepática y hemorragia cerebral entre otros.

El lapso entre los trabajos de Benivieni y Morgagni es mediado por numerosos médicos como Jean Fernell (1749 - 1558) y Teófilo Boneto (1620 - 1671), realizando más de mil autopsias, de cuyos trabajos e investigaciones culminan con la maravillosa obra de Giovanni Battista Morgagni.
c. Etapa Tisular: La utilización de lentes ópticos con fines científicos por Galileo en el siglo XVI, culmina con la invención del microscopio, instrumento con el cual la medicina obtiene un invaluable colaborador en la investigación de las estructuras corporales y composición microscópica.

El primer microscopio compuesto fue construido por Hans y Zacharis Janssen en Holanda entre 1590 y 1610, perfeccionado por el italiano Giuseppe Campani que en 1662 construye un microscopio que consta de un ocular y un lente objetivo. Robert Hooke en 1665 proyecta un sistema de iluminación, en tanto que Marcello Malphighi, creador de la anatomía microscópica, descubre la existencia de capilares en el pulmón de rana en 1661 y los corpúsculos sanguíneos en 1665.

El holandés Antonio Van Leewenhôek describe protozoarios y bacterias en 1673 con un instrumento extremadamente simple. A fines del siglo XVII John Marshall en Inglaterra introduce un condensador de luz al microscopio.

Javier Bichat (1771 - 1802) por sus numerosas observaciones de los tejidos corporales, fundamenta las bases de la histología moderna. Postula que los órganos están formados por estructuras llamadas “tissu”, que clasificó en 21 tipos, los cuales pueden formar parte de diferentes órganos y que por esa razón, la lesión de órganos diversos se manifiesta con síntomas semejantes. Sus observaciones aparecen recopiladas hacia 1800 en su libro Tratado de las membranas. Esta importante contribución científica de Bichat establece que los tejidos son la unidad básica de todo ser humano.

Mattehew Baillie (1761 - 1823) publica en 1803 su libro Anatomía Patologica de las partes más importantes del cuerpo humano, que fue el primer texto ilustrado con figuras referentes a procesos patológicos, basados en la colección de piezas anatómicas preparadas por él y su tío el médico John Hunter.
d. Etapa Celular: 1800 encontró a la patología basada en la lesión anatómica asociada a la observación clínica de la enfermedad, siendo insuficiente el estudio descriptivo macroscópico, restaba analizar la estructura microscópica de los tejidos, alcanzando pleno desarrollo hacia la segunda mitad del siglo XIX. Previo a 1850, aparecieron algunos tratados de microscopía y científicos como Rokitansky, Henle y Raspall, investigaron las alteraciones celulares producidas por la enfermedad.

Rudolf Virchow (1821 - 1902) científico alemán y una de las figuras más importantes de la medicina del siglo XIX. En 1845 fue nombrado titular de anatomía patológica en Wuzburgo, cátedra recién fundada y primera de la disciplina en Alemania. Se convirtió en director del primer instituto patológico en 1856 y para 1858 aparece su libro Patología Celular, en el cual la tesis central de Virchow es la concepción celular del organismo y que tanto en el estado de salud como en el de enfermedad, toda acción emana de la célula. Virchow al complementar, sistematizar y consolidar la teoría del daño celular, establece las bases modernas de la patología microscópica.
e. Etapa Molecular: El progreso de las disciplinas científicas depende en gran parte de mejores instrumentos de observación. El siglo XX marca un período de refinamiento del microscopio que conduce a la aplicación de nuevos métodos de investigación, haciendo posible un cambio fundamental del aspecto puramente descriptivo de los tejidos enfermos al estudio estructural ó morfológico de los procesos patológicos humanos. El ultramicroscopio es utilizado en la investigación y en la industria a partir de 1939, ha revelado mucho de lo que se conoce acerca de la morfología subcelular en organelos como mitocondrias, lisosomas ó ribosomas. La microscopía electrónica ha probado ser un instrumento indispensable en la investigación y diagnóstico patológico, permitiendo una comprensión más integral de la patogénia de las enfermedades.
3. Ramas de la patología

a. Histopatología: Estudio con el microscopio, de los tejidos y de los órganos enfermos. Incluye las siguientes disciplinas:

  • Histoquímica: es la aplicación de reacciones químicas y bioquímicas en la técnica histológica, con el fin de localizar y determinar de manera científica ciertas sustancias o su actividad.

  • Citología: es la rama de la biología que estudia las células, en lo que concierne a su estructura, sus funciones y su importancia en la complejidad de los seres vivos.

  • Inmunología: es la ciencia que estudia todos los mecanismos fisiológicos de defensa de la integridad biológica de un organismo. Estos mecanismos consisten esencialmente en la identificación de sustancias extrañas y su destrucción.

  • Hematología: es la rama de la ciencia médica que se encarga del estudio de los elementos formes de la sangre y sus precursores, así como de los trastornos estructurales y bioquímicos de estos elementos, que puedan conducir a una enfermedad.

  • Microbiología: es la rama de la biología encargada del estudio de los microorganismos, seres vivos pequeños, también conocidos como microbios. Es la ciencia de la biología dedicada a estudiar los organismos que son sólo visibles a través del microscopio: organismos procariotas y eucariotas simples. Son considerados microbios todos los seres vivos microscópicos, estos pueden estar constituidos por una sola célula (unicelulares), así como pequeños agregados celulares formados por células equivalentes (sin diferenciación celular); estos pueden ser eucariotas (células con núcleo) tales como hongos y protistas, procariotas (células sin núcleo definido) como las bacterias]. Sin embargo la microbiología tradicional se ha ocupado especialmente de los microorganismos patógenos entre bacterias, virus y hongos, dejando a otros microorganismos en manos de la parasitología y otras categorías de la biología.

  • Parasitología: Es una rama de la ciencia ecológica que trata el estudio integral del fenómeno del parasitismo, las relaciones existentes entre el parásito y el hospedador (dependencias metabólicas) y los factores ambientales que influyen sobre esta comunidad.

  • Patología Forense: Estudia las pistas que llevan a la causa de la muerte presentes en el cuerpo como un fenómeno médico.


b. Patología Clínica: es una especialidad médica que se dedica al establecimiento del diagnóstico, pronóstico y vigilancia del tratamiento de los problemas de salud, apoyando tanto a la medicina general como a otras especialidades médicas incluyendo un significativo impacto en epidemiología y salud pública. También es conocida como Medicina de Laboratorio, una disciplina médica que trata de integrar la ciencia básica a la práctica clínica. Incluye las siguientes disciplinas:

  • Química Clínica: es una ciencia que estudia la composición química de los seres vivos, especialmente las proteínas, carbohidratos, lípidos y ácidos nucleicos, además de otras pequeñas moléculas presentes en las células y las reacciones químicas que sufren estos compuestos (metabolismo) que les permiten obtener energía (catabolismo) y generar biomoléculas propias (anabolismo).

  • Microbiología Clínica: estudia la morfología de los microbios.

  • Parasitología: Es una rama de la ciencia ecológica que trata el estudio integral del fenómeno del parasitismo, las relaciones existentes entre el parásito y el hospedador (dependencias metabólicas) y los factores ambientales que influyen sobre esta comunidad.

  • Hematología: es la rama de la ciencia médica que se encarga del estudio de los elementos formes de la sangre y sus precursores, así como de los trastornos estructurales y bioquímicos de estos elementos, que puedan conducir a una enfermedad.

  • Banco de Sangre: Es el establecimiento autorizado para obtener, recolectar, conservar, aplicar y proveer sangre humana, así como para analizar y conservar, aplicar y proveer componentes de la misma.

  • Inmunohematologia: es la parte de la hematología que estudia los procesos inmunitarios que tienen lugar en el organismo en relación con los elementos sanguíneos.

  • Inmunología: es la ciencia que estudia todos los mecanismos fisiológicos de defensa de la integridad biológica de un organismo. Estos mecanismos consisten esencialmente en la identificación de sustancias extrañas y su destrucción.

  • Citogenética: es el campo de la Genética que comprende el estudio de la estructura, función y comportamiento de los cromosomas.


4. Métodos de procesamiento de los tejidos y Citologias.

a. Fijación. La finalidad de fijar los tejidos es conservarlos con el menor grado de alteración, inhibiendo los cambios autolíticos y el crecimiento bacteriano. También producen la coagulación del citoplasma el cual se torna insoluble y endurecen el tejido para facilitar el corte durante la preparación. Se obtiene por medios físicos o químicos.

b. Medios físicos. El calor de la llama o la congelación de la muestra.

c. Medios químicos. Como líquidos fijadores son utilizados, el Formol al 4%, 5% y 10%, el Alcohol, el Acido Acético, el Acido Pícrico, el Bicloruro de Mercurio y el Bicromato de Potasio. La elección del fijador depende del tejido y coloración que se va a emplear. El tiempo de fijación varía de pocos minutos a varias horas. En nuestro medio es usual utilizar Formol al 10%. El volumen del fijador debe ser veinte veces el volumen de la muestra.

d. Deshidratación. El procedimiento consiste en extraer el agua contenida en el tejido y reemplazarla por un líquido deshidratante como el alcohol, la acetona o el propanolol. Lo más utilizado es el alcohol en concentraciones crecientes, 70, 80, 90 y 96 grados. La deshidratación es realizada en una a dos horas.

e. Aclaración. Es la extracción y substitución del agente deshidratante por Xilol, Benzol, Toluol, Cloroformo o Xileno, durante treinta a sesenta minutos.

f. Inclusión. Una vez aclarado el tejido, debe ser infiltrado con un agente de inclusión, que por lo general es Parafina o Celodina. El proceso es realizado tres veces con parafina líquida a una temperatura promedio de 56 grados centígrados. Posterior a la inclusión se hace solidificar la parafina y se forman bloques de 3x2x1.5 centímetros que contienen el tejido a estudiar.Pasos de la inclusión:

  • Se ha de preparar tantos moldes cuantas piezas han de incluirse.

  • Se extrae una pieza, se la libera de la envoltura de gasa, se la ubica en el fondo del molde, orientándola para saber luego por donde ha de ser cortada.

  • Sobre la pieza puesta en el molde se vierte parafina fundida pura. Se deja el molde sobre una superficie plana y fría, se espera que la falta de calor solidifique toda la parafina, formándose así un bloque. Mientras se trabaja en una pieza las demás deben estar en la estufa.

g. Corte. El tejido incluido en parafina, es cortado en fragmentos de cinco a diez micras con un Micrótomo. Los cortes contienen entonces tejido y parafina y son denominados, membranas de corte. Las membranas son colocadas en agua tibia para que queden extendidas y se evite el recogimiento del tejido.

h. Montaje de Corte. El corte es sacado del agua y colocado en una laminilla¡ portatobjetos. Esta debe colocarse sobre una platina caliente para evaporar el agua y lograr mejor fijación del tejido a la lámina antes de su coloración.

i. Coloración. Antes de iniciar las fases de coloración, el tejido montado en la lámina debe ser aclarado con dos baños Xilol o Toluol, para eliminar la parafina de la fase de inclusión. La finalidad de la coloración es destacar el contraste natural y hacer más evidentes ciertas células, componentes tisulares y material extrínseco. Los colorantes más utilizados son la Hematoxilina (Básica) y la Eosina (Acida). De acuerdo con su naturaleza, el colorante tendrá afinidad por uno u otro elemento celular. Así los elementos celulares o tisulares basófilos, se tiñen de azul o violeta y los acidófilos de rosado.
Método de Coloración de las Citologías:

Papanicolaou: es la técnica por excelencia de la citología. Para lograr una buena preparación citológica es necesario que el la toma o recolección del material sea adecuada, una correcta y rápida fijación, y un buen proceso de coloración. Se trata de una técnica citológica compuesta por 3 soluciones: Hematoxilina Biopur, OG Biopur, EA Biopur. Pasos:

Es necesario que los preparados sean previamente fijados en alcohol 96º. El material extendido en el portaobjeto debe fijarse inmediatamente antes que comience la desecación. Lo ideal es sumergirlo en alcohol 96º no menos de 10 minutos.

Se rocía el extendido en forma uniforme durante algunos segundos a una distancia no menor a 15 - 20 cm.
¿Cómo recuperar la muestra cuando el material se dejó secar al aire?

El extendido puede rehidratarse siempre y cuando no haya habido fijación previa.

Rehidratación:

Colocar la muestra de 3 a 5 minutos en una solución a/a (por partes iguales) de agua destilada y glicerina.

Ejemplo 50 ml de agua destilada y 50 ml de glicerina. (3 - 5 minutos)

A continuación escurrir y fijar en alcohol 96º o spray fijador.

El agua hidrata y la glicerina devuelve elasticidad a las células.

¡De no contar con estos elementos!...

Sumergir la muestra para la hidratación directamente en agua corriente durante 3 - 5 minutos y fijar con alcohol 96º o spray. Luego colorear como de costumbre.
Procedimiento para la coloración de Papanicolaou

  • 10 pases (ni lentos ni rápidos) en Alcohol etílico 96º

  • 10 pase en el Alcohol etílico 70º.

  • 10 pases en el Alcohol etílico 50º

  • 10 pases en Agua Destilada

  • Hematoxilina de Harris durante 6 Min.

  • Pases en Agua destilada (hasta quitar exceso de colorante).

  • Sol ácido clorhídrico 0,5% (1 - 2 inmersiones rápidas).

  • Chorro de corriente por 5 min (chorro lento)

  • 10 pases en agua destilada.

  • 10 pases en Alcohol etílico 50 º

  • 10 pase en el Alcohol etílico 70º

  • 10 pases en alcohol etílico 80 º

  • 10 pases en Alcohol etílico 96º

  • Colocar en Naranja G 6 por un minuto y medio.

  • 10 pases en Alcohol etílico 96º

  • 10 pases en Alcohol etílico 96º

  • Colocar en EA 50 (36) (Eosina amarillenta) por 3 Min. (Usar EA 65 para orinas y esputos)

  • 10 pases en Alcohol etílico 96º durante

  • 10 pases en Alcohol etílico 96º durante

  • 10 pases en Alcohol etílico 96º

  • 10 pases en isopropanol (dejar un rato para que se deshidraten y después secar bien)

  • 10 pases muy lentos y dejando un buen rato para que se deshidranten bien, en la mezcla de isopropanol- Xilol.

  • Montar las laminillas: Con Bálsamo de Canadá y cubrir con cubreobjetos de vidrio de la medida adecuada para cobertura total de la muestra. Los cubreobjetos de las muestras cérvico vaginales, no deben ser menoers a 24 x 50mm.


Tinción rápida de Papanicolaou (método modificado)

  • 10 pases en Alcohol 96º

  • 10 pases en Agua corriente

  • Pases en Hematoxilina durante 40 Seg.

  • Virar en agua corriente hasta que esta quede transparente sin trazas de colorante.

  • 10 pases en Alcohol 96º

  • Pases en OG6 durante 40 Seg.

  • 10 pases en Alcohol 96º

  • Pases en EA durante 40 Seg.

  • 10 pases en Alcohol 96º

  • 10 pases en Alcohol 100º

  • 10 pases en Alcohol 100º/xilol a/a

  • 10 pases en Xilol

  • Montar las laminillas


Coloraciones Histoquímicas más usadas:
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