Tema I: Respuestas Celulares Ante el Estrés y las Agresiones por toxicos: Adaptacion, Lesion y Muerte




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títuloTema I: Respuestas Celulares Ante el Estrés y las Agresiones por toxicos: Adaptacion, Lesion y Muerte
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a.Hematoxilina y Eosina: La hematoxilina es un colorante catiónico mientras que la eosina es un colorante aniónico perteneciente a los xantenos. Se teñirán los núcleos de azul, citoplasmas en rosa, músculo en tonos rojizos a rosados fucsia, glóbulos rojos en naranja o rojo y la fibrina en rosa intenso. El método de coloración es el siguiente:

  • Desparafinado. Se realiza en una estufa durante 30 min. a 60º, luego se sumerge la muestra en xilol durante 10 o 15 min.

  • Hidratación.

    • Pases en Alcohol absoluto durante 5min.

    • Pases en Alcohol 96º durante 5min.

    • Pases en Alcohol 70º durante 5min.

  • Lavar en agua destilada.

  • Pases en Hematoxilina durante 5min.

  • Lavar en agua durante 2min.

  • Pases en Eosina alcoholica durante 1min.

  • Deshidratar.

    • Alcohol de 70º

    • Alcohol de 96º.

    • Alcohol absoluto.

  • Xilol.

  • Montaje.


b. Brown-Bren: Técnica utilizada para tinción de bacterias. Mediante el cual las bacterias grampositivas se tiñen de color azul y las gramnegativas se tiñen de color rojo.
c. PAS: Se usa como técnica de rutina para observar las membranas basales que separan el tejido epitelial del corión. Tiñe los núcleos de color azul, el glucógeno de color púrpura y el material PAS + (polisacáridos simples, mucopolisacáridos neutros, mucoproteínas, glucoproteínas y glucolípidos) rojo rosa.
SOLUCIONES:

  • Ácido periódico al 0.5 %

  • Hematoxilina de Mayer

  • Ácido sulfuroso :

  • Metabisulfito sódico al 10 % ------------------ 6 ml.

  • Ácido hidroclórico 1N al 10 % ---------------- 5 ml

  • Agua destilada -------------------------------- 100 ml

  • Reactivo de Shiff

  • Fucsina básica ----------------------------------- 1 gr.

  • Metabisulfito sódico anhidro ------------------ 1 gr.

  • Agua destilada ----------------------------------- 200 ml

  • Ácido hidroclórico 1 N ------------------------- 20 ml


Hervir el agua destilada, añadir la fucsina básica, agitar y enfriar a 50ºC.

Filtrar y añadir ácido hidroclórico, enfriar a 25ºC

Añadir metabisulfito sódico.

Ésta solución está lista para usarse cuando se torna casi incolora, lo cual puede llevar hasta 2 días, en un lugar oscuro.
TECNICA

  • Desparafinar e hidratar.

  • Ácido periódico al 5 % ------------------------------ 5 min.

  • Lavar en agua corriente ------------------------------ 5 min.

  • Reactivo de Shiff ------------------------------------- 15 min.

  • Bisulfito sódico al 2 % ------------------------------ 5 min.

  • Lavar en agua corriente ----------------------------- 5 min.

  • Hematoxilina de Mayer ----------------------------- 10 min.

  • Lavar con agua corriente --------------------------- 5 min.

  • Deshidratar.

  • Aclarar con xilol

  • Montar.


d. Grocott: Para la tinción de hongos (candida, aspergillus…).

  • Desparafinado.

    • Estufa durante 30 min. a 60º.

    • Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

  • Hidratación.

    • Alcohol absoluto-5min.

    • Alcohol 96º-5min.

    • Alcohol 70º-5min.

  • Lavar en H2O destilada

  • Solución de ácido crómico al 4% - 1 hora

  • Lavar en agua corriente – 5 min.

  • Bisulfito sódico al 1% - 1 min.

  • Lavar agua corriente – 5 min.

  • Lavar con agua destilada – 3-4 pases

  • Solución argéntica de trabajo:

    • En estufa 60º--------------------------------- 1 hora

    • En microondas (descongelación) -------- 1-2 min.

  • Lavar con agua destilada – 6 pases.

  • Cloruro de oro al 0.2 % - 2-5 min.

  • Lavar con agua destilada – 5 min.

  • Tiosulfato sódico al 2% - 2-5 min.

  • Lavar con agua corriente

  • Solución verde luz al 1% - 30-40 seg.

  • Deshidratar.

    • Alcohol de 96º.

    • Alcohol absoluto.

    • Xilol.

  • Montaje.


NOTA:

NO EMPLEAR PINZAS METÁLICAS:

Cuando empieza a coger color (siempre en la oscuridad) se sacan de la estufa para controlarlos.

Se enjuagan con agua destilada y se examina la tinción. Si es demasiado clara, se vuelve a aclarar con agua destilada y se coloca de nuevo en la solución de plata.

Si es demasiado fuerte se trata con el diferenciador.
Diferenciador:

Ácido sulfúrico al 0.5 %

Sulfato férrico al 0.2 %

En un litro de agua destilada se añaden 2 gr. de sulfato férrico y a ésta solución se añaden 5 ml. de ácido sulfúrico.
RESULTADOS:

Las paredes de los hongos se delinean en negro.
e. Fite Faraco: Es una tinción acido-alcohol resistente, que tiñe ciertas bacterias como ser la nocardia, la cual confiere a los filamentos una apariencia arrosariada.
f. Tricomico: Es una técnica para la coloración de fibras colágenas y elásticas. Se observan tres colores distintos; tejido conjuntivo de verde, tejido muscular de verde pardo, eritrocitos de rojizo, núcleos azul negro y citoplasma y fibras musculares rosa.
TECNICA:

  • Desparafinado.

    • Estufa durante 30 min. a 60º.

    • Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

  • Hidratación.

    • Alcohol absoluto-5min.

    • Alcohol 96º-5min.

    • Alcohol 70º-5min.

  • Lavar en H2O destilada.

  • Hematoxilina de Weigert – 5 min.

  • Lavar con agua corriente – 10 min.

  • Fucsina de Ponceau – 5 min.

  • Ácido fosfomolíbdico – 5 min.

  • Ácido fosfomolíbdico – 5 min.

  • Verde luz – 5-7 min.

  • Deshidratar.

    • Alcohol de 70º

    • Alcohol de 96º.

    • Xilol.

  • Montaje.


g. Rojo Congo: Destinado a la determinación de proteína amiloide en secciones de tejidos con el empleo de microscopios de luz común o polarizada.
TECNICA:

  • Desparafinado.

    • Estufa durante 30 min. a 60º.

    • Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

  • Hidratación.

    • Alcohol absoluto-5min.

    • Alcohol 96º-5min.

    • Alcohol 70º-5min.

  • Lavar en H2O destilada.

  • Hematoxilina de Carazzi o de Weigert – 10 min.

  • Lavar en agua corriente .. 10 min.

  • Solución Rojo Congo .. 10 min. (en el momento del uso se cogen 8 ml de rojo congo y se mezclan con 2 ml de glicerina. Filtrar)

  • Lavar en agua corriente … 5 min.

  • Yoduro potásico -- 3-4 min.

  • Lavar con agua corriente … pases

  • Deshidratar.

    • Alcohol de 70º

    • Alcohol de 96º.

    • Alcohol absoluto.

    • Xilol.

  • Montaje.


h. Cristal Violeta: es el nombre dado a un grupo de compuestos químicos empleados como indicadores de pH y colorantes. Los violetas de metilo son mezclas de: N-tetra, N-penta y N-hexametil p-rosanilinas. Es el ingrediente activo en el colorante de Gram, usado para clasificar bacterias. El violeta de genciana destruye células, y es usado en desinfectante de intensidad moderada externo.
i.Sudan IV: Es la técnica de coloración para la identificación de lípidos, principalmente para determinar lípidos homofásicos. Es una coloración progresiva, es decir, que a más tiempo de exposición al colorante mayor es la intensidad de tinción. Actua sobre el tejido adiposo y lípidos en general.
La técnica de tinción es como sigue:

  • Colocar los cortes en la solución de dicromato potásico y poner sobre portaobjetos.

  • Dejar secar al aire.

  • Sumergir en alcohol de 70º

  • Teñir con Sudán durante 5 minutos si son cortes congelados y 30 minutos si son en parafina

  • Sumergir en alcohol de 70º

  • Lavar en agua destilada

  • Contrastar con hematoxilina de Harris 30 s, o 3 min en hematoxilina de Mayer.

  • Lavar en agua destilada 10 minutos.

  • Deshidratar con alcoholes, aclarar con xilenos y montar


Resultados

  • Lípidos: rojo intenso

  • Núcleos: azul


j. Reticulina: Estas tinciones evidencian las fibras de reticulina y material de membrana basal. Las fibras de reticulina consisten en fibras finas constituidas principalmente por colágeno tipo III, mientras que las membranas basales contienen en gran parte colágeno tipo IV y laminina junto con proteoglicanos que son los responsables de la tinción con sales de plata y PAS. La aplicación más importante de estas técnicas es la distinción entre carcinomas y sarcomas basándose en la distinta distribución de las fibras de reticulina según englobaran grupos de células (carcinoma) o rodearan individualmente cada célula (sarcomas). Otra aplicación es la demostración de microinvasión incipiente del estroma por carcinomas “in situ”. Tambien se utiliza en patología hepática para evidenciar la desorganización arquitectural trabecular y en estudios de médula ósea para poner de manifiesto mielofibrosis incipiente (fibrosis reticulínica) negativa en fases iniciales para tinción de colágeno.


5. Biopsia

  • Es la operación exploratoria que consiste en separar de un ser vivo una muestra cualquiera de tejido u órgano, tanto en forma de porción orgánica como de elementos disgregados, para su examen macro y microscópico, con el propósito de determinar su naturaleza mediante una cito o histodiagnosis.

  • Es un procedimiento por el cual se obtiene un fragmento de tejido o células de un ser vivo con el objetivo de someterlo a un estudio macro y microscópico para determinar su diagnóstico. En general se le llama biopsia a todo el proceso, incluyendo las láminas preparadas con ese fin.


Metodos de Obtencion de biopsias

  • Incisión: Biopsia de hígado o de cualquier tejido superficial, se saca una parte del tejido por sección a bisturí

  • Escisión

  • Sacabocados: cuello uterino, biopsias endoscópicas

  • Raspado o cureteado: en útero y hueso.

  • Abrasión: Acción o efecto de raer o desgastar por fricción. Ej.: Balón abrasivo. Superficie lisa sobre superficie lisa.

  • Cepillado: Biopsias endoscópicas

  • Punción: Tiroides, Hígado - Agujas de Vim Silverman y de Menghini, Bazo, Pleura- Aguja de Cope, Médula osea, en cresta ilíaca o en esternón

  • Aspiración: A veces punción aspiración (Menghini), Tiroides, Hígado

  • Escoplado o trepanado: Hueso

  • Examen directo: Un tejido que se elimina solo. Ej.: mama, exudado que sale por el pezón.


Tipos de Biopsia

  • Incisional. Consiste en la extirpación de un fragmento de la lesión.

  • Por aspiración. Es la obtención de un cilindro de tejido por medio de un trócar que se introduce en el órgano afectado. Este tipo de biopsia es útil en órganos profundos o no accesibles, como el riñón, el hígado, el pulmón, la próstata, etc. Tiene riesgos en cuanto a sangramientos y a veces no es representativa o suficiente para llegar a un diagnóstico.

  • Una modalidad de esta, que hoy tiene gran importancia y utilidad es la biopsia por punción aspirativa con aguja fina (BAAF). Esta variante evita riesgos y molestias al paciente, puede realizarse ambulatoriamente, es la más rápida y económica y a pesar de ser un estudio citológico, su desarrollo ha permitido diagnósticos de gran precisión. Por ello su realización se hace cada vez más extendida y necesaria.

  • Excisional. Es la extirpación de toda la lesión junto con un margen adecuado de tejidos periféricos sanos. Es el tipo de biopsia más recomendable, sobre todo en lesiones pequeñas y accesibles, las cuales pueden ser estudiadas íntegramente y establecer sus relaciones con los tejidos vecinos.

  • Transoperatoria o por congelación. Es la biopsia que se realiza durante el acto quirúrgico mediante la congelación del tejido objeto de estudio, de modo que es posible llegar a un diagnóstico rápido para tomar de una decisión sobre el tratamiento que se ha de seguir. Este tipo de biopsia tiene una gran transcendencia e implica gran responsabilidad para el patólogo. Ante un resultado dudoso en este estudio, se deben diferir las conclusiones para el examen detallado con la técnica de inclusión en parafina, que tarda unos días más pero da detalles más completos.

  • Postoperatoria. Son las biopsias de las piezas u órganos que se extirpan, con el objetivo de precisar el diagnóstico, determinar con certeza la extensión del proceso y si la operación fue suficiente, insuficiente o excesiva.

  • Extendidos citológicos. Comúnmente llamada “citología”, es una modalidad de biopsia que consiste en el estudio solamente de muestras citológicas de órganos o tejidos. Por tanto, también incluyen la BAAF. La citología se puede clasificar en superficial y profunda. En la primera se incluye el raspado leve, la impronta y el “lavaje” de la lesión, y en la segunda, la citología de las cavidades, la citopunción y la aspirativa. Las características observadas en las células aisladas o relacionadas con el tejido disgregado que se relaciona con ella, son elementos esenciales en el diagnóstico de los extendidos citológicos donde los aspectos que se van a valorar son la celularidad de las lesiones estudiadas, la cohesividad celular, el entorno que rodea a las células y las características individuales de cada célula. Los estudios citológicos por la menor agresividad, el rápido diagnóstico que se obtiene de él y la confiabilidad diagnóstica que es proporcional a la experiencia del citopatólogo son muy usados en el diagnóstico precoz y de lesiones premalignas, por lo que se aplican con frecuencia en la asistencia primaria en los programas de detección precoz del cáncer como son el programa del cáncer cervicouterino, mama, próstata, y otros más menos empleados en la práctica asistencial.


Formas de Solicitar y Esperar una biopsia al Laboratorio

Cuando el médico de asistencia indica o realiza una biopsia debe llenar el modelo de solicitud, de gran valor e importancia para el correcto diagnóstico de enfermedad.

En este modelo además de los datos generales se incluyen los principales datos clínicos y de la lesión que permiten una adecuada correlación clínico-patológica y por tanto, un diagnóstico más completo y preciso del trastorno estudiado. Es fundamental la conservación adecuada del espécimen enviado. Por ello es de esencial importancia enviar al Dpto. de Anatomía Patológica la solicitud de biopsia correctamente llenada y la pieza en adecuada conservación.

La biopsia permite, de modo similar a la autopsia, establecer, confirmar o modificar los diagnósticos clínicos o quirúrgicos. Existen comisiones en los hospitales que califican las intervenciones quirúrgicas con vistas a su evaluación, según la coincidencia diagnóstica y la adecuada extirpación de los tejidos (es indispensable que todas sean enviadas al Dpto. de Anatomía Patológica). Al igual que la autopsia, es apreciable la importancia de la biopsia que, al precisar un diagnóstico o modificar uno equivocado, resulta de imprescindible utilización en los servicios médicos que se brindan a los pacientes.
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