Universidad central del ecuador




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fecha de publicación02.08.2016
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA
EDER RENATO OCAÑA JARA

CEPAS DE RESERVA

Son cepas idénticas obtenidas mediante un único subcultivo de una cepa de referencia



  • REACTIVACIÓN DE CEPAS


Las cepas de referencia que se encuentran almacenadas entre 0 – 5 ºC, se reconstituyen y se siembran utilizando el medio de cultivo, las condiciones de incubación y el procedimiento indicado para cada tipo de microorganismo.

A las cepas de referencia se les realiza un control de calidad de riesgos y viabilidad.


  • TÉCNICAS DE AISLAMIENTO


El objetivo es obtener cultivos en estado puro, operación imprescindible y previa al estudio e identificación de una especie bacteriana.
MÉTODOS GENERALES DE AISLAMIENTO

  1. POR DILUCIONES SUCESIVAS: Se utiliza para realizar diluciones seriadas, se comienza con una solución madre concentrada y se preparan una serie de diluciones relacionadas.

  2. POR AGOTAMIENTO EN SUPERFICIE EN UNA PLACA: Con este método se obtiene colonias aisladas, las cuales pueden pertenecer a distintas especies bacterianas las que se diferencias macroscópicamente .En general cada colonia se considera formada a partir de una célula bacteriana, aunque no es totalmente cierto puede darse el caso de que 2 o más células se den a partir de una colonia.

Si la colonia pertenece a una misma especie la colonia resultante será pura.


  • MANTENIMIENTO O CONSERVACIÓN DE LOS CULTIVOS

Los objetivos de la conservación de los cultivos se podrían resumir en los siguientes aspectos:

  1. Preservar la pureza genética del cultivo sin pérdida de ninguna de sus propiedades bioquímicas.

  2. Preservar los niveles de su productividad inicial.

  3. Lograr que el cultivo pueda ser transportado y manejado con facilidad

Este último puede ser un factor esencial en la selección de un método de preservación.


  • PRESERVACIÓN

Para mayor seguridad y minimizar la probabilidad de pérdida de cepas, cada cepa debe ser mantenida al menos por dos procedimientos diferentes.

Los métodos desarrollados para la preservación de los microorganismos se pueden clasificar en:

  • Subcultivos

  • Desecación

  • Liofilización

  • Congelación

SUBCULTIVO: Consiste en la transferencia del cultivo a un medio de cultivo fresco a intervalos que aseguren la viabilidad del mismo.

DESECACIÓN: Consiste en la separación del agua y la prevención de la rehidratación. Para estos métodos se han empleado arena, tierra y zeolita.

LIOFILIZACIÓN: Consiste en la eliminación del agua de una sustancia congelada por sublimación del hielo bajo vacío.

CONGELACIÓN: Consiste en la congelación y almacenamiento de células a muy bajas temperaturas.


  • PUREZA

La preparación de cultivos puros se lleva a cabo convenientemente aislando colonias en medios nutritivos selectivos y procediendo después a su cultivo.

  • Se reactiva la cepa del congelador en un medio de baja selectividad, se incuba a 37 ºC por 24 horas.

  • Se realiza siembra por vertido en medios de baja selectividad (TSA, PCA).

  • Elegir disoluciones adecuadas.

  • Toma y siembra de colonia aislada.

  • Estriar y luego realizar tinción GRAM.




  • VIABILIDAD

Se realiza con el objetivo de detectar el nivel de viabilidad del cultivo, lo cual permite que en la medida que ésta disminuye se puedan tomar medidas para impedir la pérdida del material.

  • Cuando la cepa está pura se procede a congelar en crio viales.

  • Se realiza un Inóculo de la cepa en BHI por 24 horas, se siembra por vertido.

  • Se realiza contaje de las cajas que tengan colonias entre 30 y 300.

  • Realizar este procedimiento cada mes.




  • IDENTIFICACIÓN

El propósito es obtener un cultivo puro. Se debe realizar un examen microscópico de células vivas y de frotis teñido por coloración GRAM.

Determinar las características nutricionales.


  • DETERMINACIÓN DE GÉNERO Y ESPECIE

PRUEBAS PRIMARIAS: Mediante estas pruebas podemos determinar el género, pueden ser:

  • Gram

  • Morfología

  • Catalasa, oxidasa

  • Fermentación de glucosa

  • Esporas

  • Movilidad

PRUEBAS SECUNDARIAS Y TERCIARIAS: Estas dependerán del género o familia determinado, ejemplo: producción de pigmentos, producción de indol a partir de triptófano, producción de coagulasa.
BIBLIOGRAFIA

  • Aseguramiento de la Calidad en las Colecciones de Cultivos Microbianos, Autor: Lic. Rosa Amelia Gonzáles MsC, documento pdf.

  • catedras.quimica.unlp.edu.ar/.../seminariostp/III-conservaciondecultivos.ppt.

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