Manual de prácticas de laboratorio




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2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
2.1 Análisis con bajo poder.

Este objetivo debe utilizarse para evaluar la calidad de la tinción.Las células blancas deberían verse fácilmente con este aumento.Si no es asi, el frotis debe ser nuevamente teñido.El borde aplumado debe ser examinado para buscar cúmulos de plaquetas ó filamentos de fibrina, indicando esto que debe realizarse una nueva toma, ya que esta evidencia de coagulación podría interferir con muchas pruebas hematológicas. Los extremos laterales y aplumado deben evaluarse en búsqueda de un número desproporcionado de leucocitos.,Las células más grandes ( por ejemplo los neutrófilos y los monocitos, tienden a acumularse más en estos lugares y si el frotis está mal hecho, se acumularán más en estas áreas, las cuales están fuera del área ideal de observación.Si la mayoría de las células se encuentran en el borde aplumado, el frotis deberá descartarse y prepararse uno nuevo.
2.2 Análisis con alto poder.

Con este objetivo existen dos problemas por resolver. En primer lugar, se debe seleccionar el área apropiada para iniciar la cuenta diferencial. Esta debe ser donde los eritrocitos se tocan pero no se sobreponen, y puede ser un área en donde se encuentren 200 eritrocitos por campo. Si la cuenta de leucocitos es muy baja, puede ser necesario incluir áreas fuera del área ideal con el fín de encontrar suficientes células blancas.El segundo problema por resolver con este objetivo, será estimar la cuenta total de leucocitos. Estando en el área ideal, contar el número de células blancas observadas en cinco a diez campos y determinar el promedio. El promedio, multiplicado por un factor de corrección que a menudo está entre 2000 y 2,500 ( 2 a 2.5 en miles) representará la cuenta total del leucocitos.
2.3 Análisis con objetivo de inmersión.

Con este objetivo, la cuenta diferencial de leucocitos debe estimarse, la cuenta de plaquetas, también debe poder estimarse y los tres tipos de células ( leucocitos , eritrocitos y plaquetas ) deben observarse en búsqueda de anormalidades morfológicas.

La cuenta diferencial consiste en identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos, y reportar estos valores como un porcentaje. Es importante incluir las células de los márgenes, así como las del cuerpo del frotis. Así, para lograr esto, debe seguirse el patrón de observación de la imagen siguiente:


El número de plaquetas también puede ser estimado con este objetivo. Empleando la misma área que para la cuenta diferencial, es decir, donde los eritrocitos se tocan pero no se sobreponen, deben contarse las plaquetas en al menos diez campos. Este número será convertido en no. de plaquetas/μl de sangre, como se hizo con la cuenta de leucocitos. Deberá calcularse el número promedio de plaquetas por campo, y dicho número se multiplicará por un factor determinado por el propio laboratorio en base a la combinación de los objetivos y oculares empleados en sus microscopios. Por ejemplo, cada plaqueta, observada representa 15,000 plaquetas ó 20,000 / μl. Si se llegaron a observar un promedio de 12 plaquetas por campo, entonces, la cuenta total de plaquetas sería de 180,000/ μl en el primer caso, ó 240,000 / μl en el segundo caso.

La última actividad a realizar con este objetivo, sería evaluar la morfología celular. Esto puede irse haciendo a medida que se va realizando la cuenta diferencial. Cualquier anormalidad ó inclusión en células rojas y blancas, deberá reportarse. También es importante evaluar la forma y el tamaño de los eritrocitos en esta misma área. Las células suelen distorsionarse en áreas muy delgadas, ó demasiado gruesas. Las plaquetas también deberán evaluarse en su tamaño y forma. Más de una forma inusualmente grande de plaquetas, en cada cinco campos deberán ser reportadas .
3. LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de laboratorio.
Microscopio de Luz

3.2 Materiales de Laboratorio


CANTIDAD

DESCRIPCIÓN

1

Frotis de sangre periférica teñido con colorante de Wright



  1. PROCEDIMIENTO.


4.1 Análisis con bajo poder.

4.1.1Evaluar la calidad de la tinción.

4.1.2Examen en el borde aplumado del frotis en búsqueda de cúmulos de plaquetas ó filamentos de fibrina.

4.1.3Evaluar extremos laterales y aplumado en búsqueda de leucocitos desproporcionados.
4.2 Análisis con alto poder.

4.2.1Seleccionar el área apropiada para iniciar la cuenta diferencial.

4.2.3Estimar la cuenta total de leucocitos.
4.3Análisis con objetivo de inmersión.

4.3.1Realizar el recuento diferencial, contando cien células en total, y diferenciando la línea celular a la que pertenecen.

4.3.2Realizar el recuento indirecto de plaquetas.

4.3.3Buscar anormalidades morfológicas tanto de los leucocitos como de los eritrocitos y de las plaquetas.

ACTIVIDADES:
- Reporte de resultados


  1. Análisis con bajo poder.




    1. Calidad de la tinción:_________________________________________________

__________________________________________________________________


    1. Examen del borde aplumado del frotis ___________________________________

__________________________________________________________________


    1. Examen de los extremos laterales y aplumado del frotis.____________________

_____________________________________________________________________


  1. Análisis con alto poder.




    1. Seleccionar el área apropiada para iniciar la cuenta diferencial.________________

___________________________________________________________________


    1. Estimar la cuenta total de leucocitos._____________________________________

______________________________________________________________________



  1. Análisis con objetivo de inmersión.




    1. Recuento diferencial


Metamielocitos _____

Bandas _____

Segmentados _____

Linfocitos _____

Monocitos _____

Eosinófilos _____

Basófilos _____

100



    1. Busqueda de anormalidades morfológicas de:


leucocitos ___________________________________________________________

SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 5

FORMULA LEUCOCITARIA Ó RECUENTO DIFERENCIAL”
1.INTRODUCCIÓN.
La fórmula leucocitaria nos da información sobre el porcentaje de leucocitos de cada tipo, en base a su morfología y características tintoriales.

A partir de estos valores y de la cuenta total de glóbulos blancos obtenidos en microlitros, podremos calcular los valores absolutos de cada línea celular en sangre periférica, y así compararlos con los valores normales de cada una de ellas.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .

Se realizará el recuento diferencial, de acuerdo como se indica en el procedimiento, y se comparará contra los siguientes valores normales .Se anexan también, además de los valores normales en %, los valores normales absolutos, que indican el número de cada estirpe celular expresado por microlitro . ( para obtenerlos, ver práctica no.7 )
-VALORES NORMALES.



TIPO CELULAR

PORCENTAJE ( % )

LÍMITES ABSOLUTOS

Metamielocitos

0-2

<10-500

Bandas

0-11

100-800

Segmentados

40-74

2000-6000

Linfocitos

12-46

1000-4200

Monocitos

1-13

100-800

Eosinófilos

0-7

<100-200

Basófilos

0-3

<10-20












3. LISTA DE REQUERIMIENTOS

3.1 Equipo de Laboratorio


  1. Microscopio de Luz



3.2 Materiales de Laboratorio


CANTIDAD

DESCRIPCIÓN

1

Frotis de sangre periférica teñido con colorante de Wright



4. PROCEDIMIENTO.

Con el objetivo de inmersión, identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos en un frotis teñido con Wright, y reportar estos valores en por ciento.Se aconseja identificar el área ideal para la observación: el área del cuerpo del frotis, donde las células se tocan pero no se sobreponen. El recorrido debe hacerse de manera vertical, para no omitir células de los márgenes y para no salirse del área ideal para el recuento.
ACTIVIDADES.

Investigar en qué casos pueden encontrarse cada una de las líneas celulares reportadas en la cuenta diferencial, con valores por arriba y por debajo de lo normal.


REPORTE DE RESULTADOS:


TIPO CELULAR

PORCENTAJE ( % )

VALORES ABSOLUTOS

Metamielocitos







Bandas







Segmentados







Linfocitos







Monocitos







Eosinófilos







Basófilos








SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 6

RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS”

1.INTRODUCCIÓN.
La evaluación de los glóbulos blancos considera el conteo total de leucocitos y la cuenta diferencial de cada uno de ellos. La medición del número total de leucocitos sirve en ocasiones de guía para evaluar la severidad de una enfermedad, siempre que se le asocie a la clínica que ésta presenta.Un aumento de los glóbulos blancos por encima de 10,000 /μl, se llama leucocitosis, que con frecuencia es acompañada por incremento de los granulocitos neutrófilos, aunque no es la única causa. Es menos frecuente que aumenten todas las líneas celulares, lo que podría deberse en realidad a una hemoconcentración. Una disminución en el recuento de glóbulos blancos por debajo de los valores normales establecidos, se conoce como leucopenia.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Las pipetas empleadas para el recuento manual de glóbulos blancos, son similares a las que se usan para el recuento de glóbulos rojos, pero presentan en su capilar superior, la grabación 11, y en la inferior, la grabación 0.5, lo cual indica una dilución distinta, que es en este caso de 1:20. Se emplea la misma cámara cuentaglóbulos llamada cámara de Neubauer, nada más que el conteo y los cálculos se realizan de diferente manera.

La cámara cuentaglóbulos presenta un retículo con una superfcie total de 9mm², de 1 mm² cada uno. Los cuadrados de las cuatro esquinas están subdivididos en 16 cuadrados, y el cuadrado central, en 25.



Cuadrículas ( L ) para recuento

de glóbulos blancos



3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Reactivos


NUM

NOMBRE DEL REACTIVO

CONCENTRACIÓN

CANTIDAD

1

Acido Acético

2%

50 ML


3.2 Equipo de Laboratorio

1. Microscopio de Luz


    1. Material de Laboratorio




CANTIDAD

DESCRIPCIÓN

1

Cámara de Neubauer

1

Pipeta para recuento de glóbulos blancos

1

Tubo de ensaye de 13 X 100

1

Boquilla




    1. Preparación del reactivo


4.2.1Líquido de Turk ó hemolizante:
-solución de ácido acético al 2%

- Agregar 1 gota de azul de metileno líquido

  1. PROCEDIMIENTO.

    1. Técnica.


4.1.1 Pipetear sangre hasta la marca de 0.5

4.1.2 Limpiar cuidadosamente con una gasa o papel suave el extremo de la pipeta y completar con el líquido de dilución hasta la marca de 11.

      1. Mezclar en el agitador por 2 minutos.

      2. Cargar la cámara con la dilución bien homogeneizada

4.1.5 Dejar reposar

4.1.6 Contar los leucocitos contenidos en los cuatro retículos de las esquinas. Estos se encuentran divididos en 16 cuadros cada uno.

      1. Realizar cálculos como indica la fórmula:


N______x______20______x______10 = N X 50

4
En donde:
N = suma de los leucocitos encontrados en los 4 retículos

20 = Título de la dilución

10 = Corrección de la cámara para llevar a 1 mm³

4 = número de retículos.


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