Manual de prácticas de laboratorio




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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 15

INTRODUCCIÓN A LAS LEUCEMIAS Y EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA GRANULOCÍTICA CRÓNICA”
1.INTRODUCCIÓN.
Las leucemias mieloides son neoplasias malignas del Sistema Hematopoyético.
Como las neoplasias en general, las células leucémicas:


  • Proliferan de manera independiente de sus factores de crecimiento ( producidos por las células estromales de su microambiente)

  • Tampoco responden a factores que las inhiben pues están protegidas de la apoptosis.

  • Esta autonomía en la reproducción celular se debe a mutaciones en los genes que codifican para:

    • factores de crecimiento

    • factores de transcripción

    • proteínas fosforiladoras( que meten a la célula en ciclo celular)

    • factores inhibidores de la apoptosis

    • factores inhibidores del ciclo celular


El término LEUCEMIA significa “ aumento de leucocitos neoplásicos en la sangre”, por lo cual es un término inapropiado.

Las LEUCEMIAS son neoplasias clonales que provienen de una sola célula maligna original la cual tiene una gran capacidad proliferativa, como la CTH ó las CFC:

L
CTH

CTH

CFC GEMM
as leucemias pueden ser agudas ó crónicas

LEUCEMIAS CRÓNICAS


  • En las Leucemias Crónicas, las células neoplásicas maduran terminalmente

  • No producen la muerte en las etapas iniciales

  • El número de células maduras es normal ó aumentado

Según el predominio de la línea celular hacia la cual maduran pueden distinguirse:


    • Leucemia Granulocítica Crónica

    • Leucemia Mielomonocítica Crónica

    • Policitemia Vera

    • Trombocitemia esencial

    • Mielofibrosis crónica idiopática con metaplasia mieloide.


LEUCEMIA GRANULOCÍTICA CRÓNICA
La mutación original se produce en una CTH, que madura terminalmente hacia todas las líneas celulares, pero lo hace de predominantemente hacia la línea granulocítica, y frecuentemente hacia la megacariocítica.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
2.1 Datos Característicos en el Diagnóstico:


  • Leucocitosis generalmente por arriba de 50,000leucocitos totales, y en más del 70% de los casos, por arriba de 100,000.




  • Presencia de granulocitos en todas las etapas de maduración.




  • Eosinofilia y sobre todo basofilia absolutas




  • Presencia de eritroblastos




  • Anemia moderada ó ausencia de ésta




  • Plaquetas normales ó aumentadas




  • Fosfatasa alcalina en leucocitos disminuída.




  • Médula Óea con Hiperplasia de células granulocíticas en todas las etapas de maduración y con abundantes megacariocitos.


2.2 Datos Definitivos Para El Diagnóstico
Datos Citogenéticos :


  • Presencia del Cromosoma Philadelphia: translocación recíproca entre los cromosomas 9 y 22. ( aumento de tirosina kinasa intracelular)




  • Presencia de translocación con formación del gen híbrido BCR/abl


3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio

Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio


CANTIDAD

DESCRIPCIÓN

1

Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas

1

Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas



4.PROCEDIMIENTO.
Observar imágenes en laminillas y/ó diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES.

- Reporte de resultados .______________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 16

EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON

POLICITEMIA VERA Y MIELOFIBROSIS IDIOPÁTICA CON METAPLASIA MIELOIDE”

1.INTRODUCCIÓN.
En las leucemias mieloides crónicas, la CTH tienen todavía más capacidad de dividirse que una CTH normal.

Si la maduración predomina hacia la línea de los eritrocitos, se tendrá:Policitemia vera.

Cuando la proliferación es predominantemente hacia la línea de los megacariocitos, pero éstos se mueren en la etapa de megacariocito maduro, a esta neoplasia se le llama Mielofibrosis con Metaplasia Mieloide.


1.1 POLICITEMIA VERA

Policitemia ( elevación de los glóbulos rojos ó masa eritrocítica total) de orígen primario en la que hay que descartar otras causas de policitemia secundaria como son:


  • Enfermedades con dificultad en la oxigenación sanguínea: tabaquismo crónico, síndrome de Pickwick.

  • Fístulas arteriovenosas ó cardiopatías congénitas.

  • Hemoglobinas anormales que producen hipoxi tisular.

  • Tumores productores de eritropoyetina.


1.2 MIELOFIBROSIS CRÓNICA IDIOPÁTICA CON METAPLASIA MIELOIDE

Se origina también en una CTH que madura hacia todas las líneas mieloides pero predominantemente hacia los megacariocitos

En la Médula Ósea existe aumento de todas las líneas, pero predominantemente hacia los megacariocitos los cuales mueren en la etapa de megacariocitos maduros, liberando los factores de crecimiento fibroblásticos, lo cual lleva a la mielofibrosis.

Al ocuparse el tejido medular por el tejido fibroso, se origina la hematopoyesis extramedular.

En sangre periférica usualmente hay un cuadro leucoeritroblástico.( elevación del número de granulocitos inmaduros y muchos eritroblastos

2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .

2.1 Criterios para el Diagnóstico de Policitemia Vera:


  • Proliferación de la CTH hacia todas las lineas con predominio hacia la línea eritrocítica:plaquetas ,eritroblastos ,basofilia , eosinofilia, granulocitosis con células no más inmaduras que los mielocitos.Sin embargo la Biometría Hemática no es definitiva.

  • Trombocitosis > 400,000/ μl

  • Leucocitosis > 12,000/ μl sin fiebre ó infección

  • Aumento de fosfatasa alcalina leucocitaria sin fiebre ó infección.

  • Aumento de vitamina B12 sérica ó transcobalamina

  • Cromosoma Philadelphia negativo.



Estudio de Cortes Histológicos de Médula Ósea en Policitemia Vera


  • Hiperplasia notable, con aumento de todas las líneas celulares, principalmente eritroblastos y megacariocitos.

  • Células Grasas disminuídas ó ausentes.

  • El 30% de pacientes desarrollan mielofibrosis con metaplasia mieloide.


2.2 Criterios para el Diagnóstico de Mielofibrosis Idiopática Crónica con Metaplasia Mieloide.


  • En médula ósea, aumento de todas las líneas, pero predominantemente hacia los megacariocitos.

  • Mielofibrosis desde el principio en algunos pacientes, aunque no en todos, que se demuestra con gruesas fibras de colágena en médula ósea y sustitución de la celuraridad normal por tejido fibroso, ocasionada por liberación de factores de crecimiento fibroblástico por los megacariocitos malignos.

  • En sangre periférica puede haber elevación o disminución de plaquetas y granulocitos .

  • En sangre periférica, cuadro leucoeritroblástico ( granulocitos inmaduros y muchos eritroblastos , anemia y poiquilocitos ( sobre todo dacriocitos ).

  • Realizar diagnóstico diferencial con otras enfermedades que causan mielofibrosis.( los demás sindromes mieloproliferativos crónicos ).

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio

Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio


CANTIDAD

DESCRIPCIÓN

1

Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas

1

Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas



4.PROCEDIMIENTO. Observar imágenes en laminillas y/ó diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES.

- Reporte de resultados .______________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 17

EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON LEUCEMIA MIELOMONOCÍTICA CRÓNICA Y TROMBOCITEMIA ESENCIAL”
1.INTRODUCCIÓN.
Cuando la maduración de la CTH es predominantemente hacia los neutrófilos y monocitos, la leucemia se llama Leucemia Mielomonocítica Crónica.

Cuando la maduración predomina hacia las plaquetas, se trata de Trombocitemia esencial.
1.1LEUCEMIA MIELOMONOCÍTICA CRÓNICA
Leucemia Mielomonocítica Crónica ó Mielodisplasia Tipo IV.

Cuadro parecido al de la LGC, pero con un incremento en la maduración hacia la línea de los monocitos .


    1. TROMBOCITEMIA ESENCIAL ( Primaria ó Hemorrágica )


La célula que sufre la mutación neoplásica, es la CTH, que madura hacia todas las líneas, pero con predominio hacia la línea de megacariocitos-plaquetas.


2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
2.1 Criterios para el Diagnóstico de Leucemia Mielomonocítica Crónica.


  • Monocitos displásicos, ó células híbridas entre mielocitos y monocitos.

  • Menos del 15% de los granulocitos son inmaduros.

  • Cambios displásicos +++.( apéndices nucleares ; núcleos de neutrófilos muy largos )

  • Más de 1000 monocitos /μl ( ó más del 3% ),

  • Anemia leve.

  • En médula ósea los mieloblastos son <20%.

2.2 Criterios para el Diagnóstico de Trombocitemia Esencial

  • Cuenta de Plaquetas por arriba de 600,000/μl

  • Hemoglobina < 13 g/dl

  • Ausencia de Cromosoma Philadelphia ó del gen híbrido BCT/abl

  • Fibrosis medular ausente ó menos de 1/3 de la biopsia

  • Ausencia de otra causa de trombocitosis ( trombocitosis secundaria )

  • Médula Ósea con hiperplasia moderada de las líneas eritroblástica y granulocítica y aumento marcado de megacariocitos.

  • Descartar otras causas de Trombocitosis Secundaria, como:Deficiencia de Hierro,Hemorragias crónicas, Procesos inflamatorios ó infecciosos crónicos, Neoplasias malignas no hamatopoyéticas, Pacientes esplenectomizados.


3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de Laboratorio

Microscopio de Luz
3.2 Materiales de Laboratorio


CANTIDAD

DESCRIPCIÓN

1

Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas

1

Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas



4.PROCEDIMIENTO. Observar imágenes en laminillas y/ó diapositivas correspondientes con estas alteraciones.


ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRÁCTICA No. 18

EVALUACIÓN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.

CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M0 ”
1.INTRODUCCIÓN.
LEUCEMIAS AGUDAS


  • En las leucemias agudas, las células neoplásicas no maduran teminalmente; generalmente maduran hasta la etapa de blasto ó un poco más allá.

  • Para que se consideren agudas deben tener > 20% de blastos en M.O.

  • Las células blásticas inhiben la proliferación de las clonas normales.

  • Los pacientes tienen anemia, plaquetopenia, granulocitopenia.

  • La muerte sobreviene por hemorragias, por la plaquetopenia e infecciones.



La Leucemia M0, es una leucemia aguda cuya cuenta típica de Médula Osea es la siguiente:
96% de Mieloblastos ( 1a)

4% de eritroblastos ( eritroblastos y granulocitos en maduración: muy disminuídos ). Por lo tanto: 0-3% de los blastos son positivos para tinción citoquímica de MIELOPEROXIDASA.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Criterios para el diagnóstico de la Leucemia Aguda M0


  • Demostrar con anticuerpos anti-mieloperoxidasa, la presencia de esta enzima ( MPO) en el Retículo Endoplásmico Rugoso ó en el Aparato de Golgi. Ó Demostrar la presencia de proteínas de membrana CD13 ó CD33 con anticuerpos monoclonales .

  • Demostrar la ausencia de esterasas específicas, que son propias de la serie monocítica, Ó Demostrar la ausencia del marcador monocítico CD14 y que descartan la Leucemia M5a ó monoblástica .

  • Demostrar la ausencia de marcadores megacariocíticos como CD41 ó CD61, que descartan Leucemia M7 ó Megacarioblástica.

  • Demostrar la ausencia de marcadores de linfocitos que descartan leucemia linfoblástica: de Precursores B: CD10, CD19, y TDT. Y de Precursores T: CD2, CD3, CD5, CD7 y TDT.
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