Actividades 47 Actividades 49 Preparado de material de observación al microscopio 50




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MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES




  1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.

  2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.

  3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.

  4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.

  5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.

  6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina, revólver y condensador).

  7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.

  8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.

  9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

  10. Para transportar el microscopio se recomienda utilizar siempre las dos manos, sujetándolo por el brazo con una mano y sosteniéndolo del pie con la palma de la otra mano. Se debe desplazar en posición vertical para evitar la caída del ocular y/o del espejo o fuente de luz.




  1. En la mayoría de los microscopios el brazo debe quedar hacia el observador. Debe apoyarse correctamente el aparato hacia el centro de la mesada


ACTIVIDADES
1. Identifique y rotule las partes componentes del microscopio en la figura 1 presentada a continuación a partir de la observación del microscopio del que dispone.

ALGUNOS CONCEPTOS IMPORTANTES EN MICROSCOPÍA

Aumento:

Es la proporción entre el tamaño de la imagen observada al microscopio y el tamaño real del objeto. El aumento total puede calcularse como el producto del aumento del ocular por el del objetivo.

Distancia frontal:



Es la distancia ente el objeto observado y la lente del objetivo cuando el preparado se encuentra enfocado correctamente. Es inversamente proporcional al aumento, es decir, que a medida que se utilizan objetivos de mayor aumento disminuye la distancia frontal y por lo tanto aumenta el riesgo de romper el preparado.

Profundidad de campo o de foco o poder de penetración:
Es el espesor del preparado que se observa con nitidez, es decir, profundidad de planos que están en foco en un momento dado. Con aumentos medianos o grandes, al mover el tornillo micrométrico, podemos observar sólo pequeños espesores con nitidez, mientras que por encima y por debajo de esta zona la imagen se desvanece.

La profundidad de foco guarda relación inversa con el aumento: es tanto menor cuanto mayor es el aumento de la lente. Con inmersión en aceite, la profundidad de campo es muy escasa (menor que 1 m).


Campo observado:

Es la porción del preparado incluida en la imagen. Se representa por el diámetro de la parte de la preparación que se está observando (área del campo). El tamaño del campo observado es inversamente proporcional al aumento total del microscopio, y por esta razón las lentes de pequeño aumento son útiles para rastrear la preparación. Si cambiamos de un objetivo a otro de mayor aumento, observaremos una imagen más aumentada pero que incluirá sólo una parte de lo que observábamos con el objetivo menor.

Poder de resolución:

Es la capacidad de las lentes de distinguir o resolver (mostrar separados) con nitidez dos puntos situados muy próximos entre sí. Se expresa como la distancia mínima que permite dar una imagen bien definida de dos puntos, en vez de verlos como uno solo.

Cuanto mayor es el poder de resolución (PR), menor es la distancia que separa dos puntos entre sí sin que estos se confundan. En consecuencia, cuanto mayor sea el poder resolutivo del objetivo, más finos serán los detalles de la preparación que puedan distinguirse.
Límite de resolución:

Es la distancia mínima que debe existir ente dos puntos del objeto para que puedan visualizarse separados. En los microscopios ópticos, el límite de resolución no es, en general, inferior a 0.2 m.
Apertura numérica:

Es una medida es una medida de la capacidad del microscopio de agrupar las refracciones de la luz producidas por los finos detalles del objeto, debido a que determina el tamaño del haz de luz que es captado por el objetivo luego de haber pasado a través del objeto. Es una característica propia de cada objetivo, es por esto que forma parte de las inscripciones grabadas en los objetivos.
ACTIVIDADES


  1. Observando los distintos elementos del microscopio ubique los que corresponden a la parte óptica.

  2. ¿De qué partes del microscopio depende la correcta iluminación de la preparación?

  3. ¿A qué partes del microscopio debe dirigirse la luz de la lámpara? ¿Por qué?

  4. ¿Qué función tienen el espejo, el filtro, el diafragma y el condensador en la iluminación?

  5. ¿Cuáles son las características que tiene la imagen final del microscopio compuesto? Al desplazar el portaobjetos, ¿en qué sentido se mueve la imagen?

  6. ¿Qué combinaciones de aumentos (del ocular, del objetivo y total) pueden hacerse con el microscopio del que se dispone?

  7. ¿Por qué es conveniente centrar en el campo de observación el objeto que nos interesa ver de la preparación si queremos observarlo a gran aumento?

  8. A
    nalice las 4 imágenes que aparecen a continuación. Ellas responden a un mismo objeto visualizado mediante cuatro instrumentos diferentes. Indique las características de las distintas imágenes. ¿Cuál le parece el instrumento más eficiente? Fundamente su respuesta.

¿CÓMO SE PREPARA EL MATERIAL PARA SU OBSERVACIÓN BAJO EL MICROSCOPIO?
Existen diversas técnicas de preparación del material para su observación bajo el instrumental óptico. Fundamentalmente, se requiere que los portas y cubreobjetos se encuentren perfectamente limpios, preferentemente enjuagados con alcohol fino y secos. La preparación del material se debe realizar sobre una superficie limpia y plana. En caso de realizar cortes, éstos deben ser sumamente delgados como para permitir el paso de la luz a través del material. Además del montaje húmedo existen dos técnicas especiales para realizar el montaje del material: SQUASH o aplastado y FROTIS o extendido.


  • SQUASH: consiste en la disgregación de la muestra mediante el aplastamiento del material entre el porta y cubreobjetos. Para realizarlo se siguen los siguientes pasos:



  • Se disgrega el material con la ayuda de pinzas y alfileres o agujas. Si se requiere, se lo somete a coloración durante el tiempo necesario.






  • Se cubre el material con un cubreobjetos.




  • Se apoya el portaobjetos sobre una superficie dura y

completamente plana.


  • Se coloca sobre el cubreobjetos un papel secante o un

papel de filtro doblado y se aplasta con el dedo pulgar

sin deslizar ni rotar el cubreobjetos.


  • Se debe operar con precaución pero con firmeza para evitar la rotura del material.



  • FROTIS: consiste en esparcir el material generalmente líquido o semilíquido de modo que quede distribuido uniformemente en una delgada capa. Para ello se utiliza otro portaobjetos de borde muy parejo que se desliza sobre el primero desde un extremo al opuesto. Se procede del siguiente modo:






  • Se coloca una gota de material sobre

un extremo del portaobjetos limpio y seco .


  • Se apoya sobre la gota un borde del

otro portaobjetos formando un  

ángulo agudo.


  • Cuando la gota se extienda por

capilaridad a todo el ancho del

portaobjetos, se desliza hacia el otro

extremo con un movimiento suave,

rápido y uniforme.

Realice un frotis y un squash con el material brindado en el trabajo práctico.

¿Cuáles son las ventajas y qué limitaciones presenta el microscopio óptico en la observación de estructuras biológicas?


  • CON EL MICROSCOPIO ÓPTICO SE PUEDEN OBSERVAR:


  • La forma general de la mayoría de las células procariontes

  • La forma general de las células eucariontes

  • Algunas organelas eucariontes: núcleo, nucléolos, cromosomas, mitocondrias, cloroplastos, flagelos, cilias, centríolos, vacuolas, pared celular. Estas estructuras se identifican con claridad utilizando alguna técnica accesoria con preparación de la muestra.


  • NO PUEDEN OBSERVARSE CON EL MICROSCOPIO ÓPTICO:


  • Las bacterias más pequeñas

  • La estructura interna de las células procariontes

  • La estructura de las organelas eucariontes

  • La membrana plasmática

  • Los conjuntos membranosos como los retículos endoplásmicos y el aparato de Golgi, aunque su ubicación en la célula puede ser revelada mediante ciertas técnicas

  • Los ribosomas

Actividades:

Observe las siguientes figuras y discuta acerca de los objetivos utilizados en cada caso.

Figura 2:



ESTEREOMICROSCOPIO O LUPA BINOCULAR
El estereomicroscopio consta realmente de dos microscopios completos, cada uno con su objetivo y ocular en los que, al no coincidir sus ejes ópticos, las imágenes formadas en los oculares son distintas (lo mismo que ocurre con la visión ocular), por lo que vemos una imagen de tres dimensiones.

No debe confundirse este aparato óptico con los microscopios binoculares, ya que en éstos la imagen formada en un único objetivo es desdoblada en dos imágenes idénticas por un prisma situado entre el objetivo y los dos oculares.

Puede apreciarse que la lupa posee un par de oculares, cada uno de los cuales se enfoca independientemente del otro, con el fin de proveer una imagen nítida para ambos ojos. Nótese que éste es un instrumento de baja magnificación.

NORMAS BÁSICAS PARA EL CUIDADO Y MANEJO DE LA LUPA BINOCULAR

La mayoría de las normas de cuidado, limpieza y transporte, recomendadas para el microscopio compuesto deben tenerse también en cuenta al utilizar la lupa binocular.

Además se tendrán presentes las siguientes normas:


  • Moviendo los tubos oculares se busca la distancia interpupilar adecuada para cada observador, de manera de obtener una imagen en tres dimensiones.




  • Enfoque primeramente con el ocular fijo y luego ajuste el foco de la imagen tridimensional con el ocular de foco ajustable.




  • Debe colocarse en la platina una placa de contraste, de un color tal que realce la observación.




  • El tornillo de sujeción debe estar suficientemente apretado para evitar la caída del brazo de la lupa


CARACTERÍSTICAS Y FUNCIONAMIENTO DE LA LUPA BINOCULAR

ACTIVIDADES


  1. ¿Cómo es la distancia de trabajo en relación con la del microscopio óptico?

  2. ¿Por qué no existe tornillo micrométrico? ¿Cómo es la profundidad del campo?

  3. ¿Al desplazar un objeto observado, en qué sentido se mueve la imagen final?

  4. ¿Cuáles son las características de la imagen final?

  5. ¿Qué finalidad tiene el ocular ajustable?

  6. O
    bserve bajo lupa el material brindado. Esquematice lo observado y coloque referencias e indique el aumento obtenido.



Tomado de la Guía d trabajos Prácticos de la Universidad Nac. De Mar del Plata. Introducción a la Biología

CÁLCULO DE AUMENTOS

Las fotografías y los dibujos de estructuras observadas bajo el microscopio muestran las estructuras de un tamaño mucho mayor al real por eso se dice que están aumentadas. Es de muchísima utilidad conocer cuan aumentada o disminuida está la imagen respecto del espécimen u objeto real. Este factor es llamado AUMENTO.
¿Cómo se calcula el aumento de determinada imagen?
De acuerdo con la siguiente ecuación:
AUMENTO =TAMAÑO DE LA IMAGEN O DIBUJO / TAMAÑO REAL DEL OBJETO O ESPECIMEN EC. (1)

A = TI /TRO

El tamaño de la imagen puede estar dado por el tamaño de un objeto en una fotografía o un dibujo realizado por nosotros mismos a partir de una copia del objeto real- Tal como se deduce a partir de (1) también se puede conocer el tamaño real del objeto si se tiene el aumento. De la misma manera se puede realizar y utilizar las barras de escala que suele acompañar las micrografías o fotografías Veamos un ejemplo-
En la figura 2a se desea conocer el diámetro real de la célula animal indicado por el segmento AB. Se sabe que la imagen se observó con un aumento de X

400 –
1. Mida el segmento AB

2. Esta medida será equivalente a TI (puede expresarla en cm aunque es conveniente que pase la medida a μm)

3. Reemplace en la formula y despeje TRO lo que será equivalente a:

TRO = AB /400 (el aumento no tiene magnitud mientras que el segmento AB estará expresado en cm o más apropiadamente en μm)
Otro ejemplo:

El segmento AB de la figura 2 de la página 52 en su tamaño real es de 50 μm, calcule el aumento de la figura.
1-Mida la distancia AB en la figura

2. Pase a μm AB

3- Calcule A = AB μm / 50 μm

Nuevamente el valor de A es un número adimensional
UNIDADES DE MEDICIÓN
De acuerdo con el Sistema Internacional (S.I.) las unidades que se utilizarán y sus equivalencias serán:
1 m = 1000 mm
1 mm = 1000 μm

1 μm = 1000 nm (nanómetro)

ACTIVIDADES
1. A continuación se presentan una serie de imágenes de organismos vivos para las que se utilizaron microscopios de transmisión electrónica, microscopio óptico y lente fotográfica. Se identifica en cada figura el nombre de la especie fotografiada.

a) Investigue los tamaños reales de cada especie y construya una escala de para cada imagen.

b) Indique el aumento de la imagen.

c) En base a su escala indique el tamaño del organismo en μm y mm (utilice notación científica cuando corresponda).

d) Indique que tipo de instrumento óptico se habrá utilizado en cada caso y por qué

e) Indique a que reino y Filum pertenece cada uno de los organismos fotografiados. ¿Alguno de estos no es considerado un organismo vivo, por qué?

f) Realice una breve síntesis de la biología de cada uno (forma de vida, reproducción, movilidad, importancia sanitaria)
a) Amoeba proteus

http://www.oberlin.k12.oh.us/talent/isp/reports2002/amoebaproteus/images/amoeba.jpg

b) Treponema pallidum ingresando al organismo
Fuente: Science




c) Streptococcus pneumoniae

d) Virus del Papiloma Humano (HPV)



e) Echinococcus granulosus



f) Aedes aegyptis


Link de b a f: http://www.losmicrobios.com.ar/microbios/imagenes.cfm






ESTUDIO Y RECONOCIMIENTO DE LAS BIOMOLÉCULAS QUE FORMAN PARTE DE LOS ORGANISMOS VIVIENTES

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