Pensamiento, diálogo y accióN”




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LICEO NUEVOS HORIZONTES

PENSAMIENTO, DIÁLOGO Y ACCIÓN”

Grado séptimo

2015

2014



Practica de laboratorio I

Extracción de DNA de células vegetales
Objetivos

  • Extraer con técnicas sencillas el DNA a partir de material vegetal y animal.

  • Establecer la relación entre el proceso de extracción  y propiedades físicas y químicas del ADN.

Introducción

El acido desoxirribonucleico (Fig.1) es un polímero de nucleótidos de elevada masa molecular que se encuentra presente en el núcleo de las células eucarióticas animales y vegetales.

http://whyfiles.org/075genome/images/dna.gif

La extracción de ADN requiere de la ruptura de la célula que lo alberga, o cual se consigue mediante el empleo de métodos físicos y químicos y su purificación posterior eliminando proteínas acompañantes y fragmentos de RNA.

En la actualidad la Ingeniaría Genética ha diseñado métodos para manipular los ácidos aprovechando sus propiedades singulares, en particular las del ADN. Sin embargo, existen métodos sencillos para la extracción de ADN a partir de material vegetal y animal que permite visualizar las hebras de este ácido nucleico y reconocer su presencia con la reacción de difenilamina.

Materiales


  • 1 Agitador de vidrio

  • 1 Espátula

  • Gasa

  • 1 Gradilla

  • 1 Mortero - pistilo

  • Papel aluminio

  • 3 Pipetas (1, 5 y 10 ml)

  • 1 pipeta pasteur

  • 5 tubos de ensayo

  • 2 vasos de precipitado (50 ml)

  • NaCl 5%

  • alcohol

  • Champú transparente o detergente líquido

  • Agua destilada

  • 1 cebolla pequeña, 1 papayuela, 6 fresas maduras.




Procedimiento

Para llevar a cabo la extracción de ADN hay que realizar una serie de procedimientos básicos. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y  la membrana plasmática del tejido vegetal para así  poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar  libre el ADN. Por ultimo hay que puedan proteger el ADN de enzimas o agentes externos que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

Procedimiento 1

  1. Macere la cebolla cabezona en el mortero con el pistilo, adicionando 20 ml de NaCl.

  2. Deje en reposo durante 10 minutos.

  3. Filtrar con la gasa.

  4. Tomar 10 ml del filtrado y adicionarlos en un tubo de ensayo.

  5. Adicionar 5 mL de alcohol.

  6. Dejar reposar durante 3 minutos. Observar y anotar lo observado.

Procedimiento 2

Repita los pasos del 1 al 4

  1. Macere la papayuela.

  2. Filtre el macerado

  3. Vierta el filtrado en un tubo de ensayo donde antes haya depositado filtrado de la cebolla, espere 10 minutos.

  4. Adicione 3 ml de alcohol, espere 3 minutos. Observe y anote los resultados.

Procedimiento 3

Repita los pasos del 1 al 4 de procedimiento 1

  1. Mida con la pipeta 1 ml de champú (su equivalente 5 gotas) y viértalo en el tubo de ensayo.

  2. Tape el tubo con papel aluminio, mezcle lentamente por inversión. Repita el movimiento por 10 veces.

  3. Déjelo reposar 10 minutos.

  4. Transcurrido el tiempo, adicione por las paredes del tubo lentamente 3 ml de alcohol para precipitar el ADN. Observe y registre os resultados.

Procedimiento 4

Repita los anteriores procedimientos con la fresa.


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