Universidad de sancarlos de guatemala

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UNIVERSIDAD DE SANCARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS, FASE I

UNIDAD DIDACTICA: BIOQUÍMICA MÉDICA

2º AÑO. CICLO ACADEMICO 2013

PRÁCTICA DE LABORATORIO No. 8:

LABORATORIO DE GENÉTICA.

Lectura Obligatoria: Del texto “Bioquímica” 5ª. Ed. de Harvey, Unidades 32 y 33

y del texto “Bioquímica Médica” 3ª. Ed. de Baynes, Capítulos 35 y 36.
Con el estudio y desarrollo de la presente práctica de laboratorio el estudiante adquiere el conocimiento de medios de investigación en genética que se desarrollan actualmente en nuestro país y reconoce la utilidad de los instrumentos de laboratorio que especialistas pioneros de la investigación usan para el diagnóstico de patologías resultantes de alteraciones genéticas.

Con alcanzar esta competencia el estudiante:

Describe las técnicas de laboratorio que permiten efectuar reacciones de extracción del ADN.
Describe las técnicas de PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa, por sus siglas en inglés)
enzima utilizada para sintetizar copias de una cadena madre de ADN.
Explica la aplicación de estas técnicas en la producción por ejemplo de Insulina y Eritropoyetina humanas en bacterias y su importancia médica.
Explica la aplicación de estas técnicas en el diagnóstico de enfermedades resultantes de errores congénitos del metabolismo, por deficiencias enzimáticas o proteínas anormales.
Identifica las enfermedades resultantes de enfermedades genéticas de índole familiar.
Describe las técnicas de laboratorio que permiten efectuar la obtención y reconocimiento del CARIOTIPO y la utilidad del procedimiento en la identificación de anormalidades asociadas con enfermedades genéticas.

GUIA DE TRABAJO:

Indique los pasos a seguir para la Extracción de ADN según la técnica utilizada en nuestro Laboratorio, explicando cada uno de ellos.
Explique en qué consiste la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR).
¿Cuáles son los pasos que se llevan a cabo para la realización de la PCR?
Explique qué es y cómo funciona un Termociclador.
Explique qué es un Primer o cebador.
¿Cuántas copias de ADN podemos obtener al finalizar la PCR.
¿Cuál es la diferencia entre PCR estándar y PCR de Tiempo Real?
Explique cuál es la utilidad clínica de la PCR.
Con respecto a la Electroforesis en Gel explique:

a) Su funcionamiento.

b) Cual es su interpretación.

c) Su utilidad en el Diagnóstico Clínico.

10. Explique que son los oncogenes. ¿Qué son los genes Ras y cuál es su función?

Mencione dos ejemplos en los que se utilicen los genes Ras como marcadores tumorales.

11. Sugerencias y Comentarios.

HEPS/2013.

UNIVERSIDAD DE SANCARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS, FASE I

UNIDAD DIDACTICA: BIOQUÍMICA MÉDICA

2º AÑO. CICLO ACADEMICO 2013

PRÁCTICA DE LABORATORIO No. 8

LABORATORIO DE GENÉTICA.
PROTOCOLO DE EXTRACCION DE ADN:
1) Tomar la muestra (con hisopo) y colocarla en un tubo con solución fijadora.
2) Agitar la muestra, pipetear 1000 mcl y colocarla en un tubo Eppendorf; identificarla.
3) Centrifugar a 12,000 rpm (16G) durante dos minutos; descartar el sobrenadante.
4) Resuspender con 1000 mcl de solución de PBS (Fosfato Buferado Salinizado).
5) Centrifugar a 12,000 rpm (16G) durante dos minutos; descartar el sobrenadante.
6) Agregar 300 mcl de Solución de Lisis Celular (SLC), mezclar.
7) Agregar 250 mcl de Solución de Lisis Nuclear (SLN), mezclar.
8) Agregar 100 mcl de Precipitador de Proteínas Universal, mezclar.
9) Agitar con vortex durante 20 segundos.
10) Dejar reposar en hielo (Refrigerador) por 20 a 30 minutos.
11) Centrifugar a 12,000 rpm (16G) durante cuatro minutos. Luego se deberá tener especial cuidado en extraer el sobrenadante (donde se encuentra el ADN), y colocarlo en un nuevo tubo Eppendorf.
12) Agregar 600 mcl de Alcohol Isopropílico (Isopropanol), agitar.
13) Centrifugar a 12,000 rpm (16G) durante dos minutos; descartar el sobrenadante.
14) Agregar 800 mcl de Alcohol Etílico (Etanol), agitar.
15) Centrifugar a 12,000 rpm (16G) durante dos minutos; descartar el sobrenadante.
16) Dejar secar hasta que se evapore el Etanol.
17) Rehidratar y colocar sobre un plato caliente (65ºC), durante una hora.
18) Almacenar a -20ºC.

HEPS/2013.

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